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Eine einfache Frage zu Amöben (Naegleria fowleri)

Eine einfache Frage zu Amöben (Naegleria fowleri)



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Ich habe eine ganz einfache Frage zu Naegleria fowleri Amöbe. Einige Experten behaupten, dass das Kochen des Wassers für 15 Minuten tötet Naegleria. Allerdings habe ich das irgendwo studiert Naegleria kann sich in Zystenformen verwandeln, wenn die Umgebung oder die Atmosphäre rau wird, um sich selbst zu schützen. Die Frage ist also, ob es möglich ist für Naegleria Siedetemperatur zu überleben, wenn das Wasser 15 Minuten lang bei 100 Grad Celsius gekocht wird, indem es sich in Zystenform umwandelt und in die Nase des Menschen eindringt und den Menschen tötet?


Das habe ich irgendwo studiert Naegleria kann sich in Zystenformen verwandeln, wenn die Umgebung oder die Atmosphäre rau wird, um sich selbst zu schützen.

Dies ist wahr und kann aus einer Vielzahl von Gründen geschehen, einschließlich extremer Temperaturen (heiß oder kalt), Mangel an Nahrung und Überfüllung.

Ist es möglich für Naegleria Siedetemperatur zu überleben, wenn das Wasser 15 Minuten lang bei 100 Grad Celsius gekocht wird, indem es sich in Zystenform umwandelt und in die Nase des Menschen eindringt und den Menschen tötet?

Kurzum: Nein, das ist nicht möglich. Laut einer Veröffentlichung des Environmental Research Center und der U.S. Environmental Protection Agency:

Bei 51, 55, 58, 63 und 65 °C Naegleria überlebten etwa 30, 10, 5, 1 bzw. < 0,5 min.


Abgesehen davon besteht keine Chance, dass nur die Zahlen aus der Veröffentlichung entfernt werden Naegleria würde 15 Minuten in kochendem Wasser von 100 ° C überleben.


Ein Mann starb, nachdem er sich eine gehirnfressende Amöbe aus einem Wasserpark zugezogen hatte: Was Sie wissen müssen

Wochen nach dem Besuch eines Wasserparks in North Carolina ist ein Mann an einer hirnfressenden Amöbe gestorben, was die Menschen dazu veranlasst, die Sicherheit der beliebten Sommeraktivität in Frage zu stellen.

Eddie Gray verbrachte den 12. Juli mit seiner kirchlichen Missionsgruppe im Wasserpark Fantasy Lake in Cumberland County, North Carolina. Gesundheitsbeamte von North Carolina glauben, dass er sich an dem künstlichen See mit Naegleria fowleri, einer Amöbe, die im Sommer natürlich in warmem Süßwasser vorkommt, infiziert hat.

Fälle der hirnfressenden Amöbe sind äußerst selten – während in den Vereinigten Staaten jedes Jahr Millionen von Schwimmern ins Wasser gehen, erkranken nur etwa 0 bis 8 Menschen daran. Aber bevor Sie den Wasserpark besuchen, müssen Sie Folgendes wissen, um sicher zu bleiben.

Was genau ist eine hirnfressende Amöbe?

Naegleria fowleri, allgemein als hirnfressende Amöbe bezeichnet, ist ein einzelliger lebender Organismus, der eine seltene und fast immer tödliche Infektion des Gehirns verursachen kann, die als primäre Amöben-Meningoenzephalitis (PAM) bezeichnet wird. Laut einem Bericht der Centers for Disease Control haben in den USA von 1962 bis 2015 nur drei von 138 Menschen die Infektion überlebt.

Wo wohnt es?

Gehirnfressende Amöben kommen am häufigsten in warmen Süßwassern wie Seen, Flüssen und heißen Quellen vor. Es lebt auch in schlecht gepflegten oder minimal gechlorten Schwimmbädern und bleibt in diesen Lebensräumen, um sich von Bakterien zu ernähren.

𠇊moeba kommt natürlich vor, daher könnte es in jedem Süßwasser vorkommen,” Die Sprecherin des Florida Department of Health in Orange County, Mirna Chamorro, sagte zuvor PEOPLE.

Die Mehrheit der Infektionen durch Amöben trat in � südlichen Staaten auf, wobei mehr als die Hälfte aller Infektionen in Texas und Florida auftraten,”, so die CDC. Naegleria kommt nicht in Salzwasser vor.

Wie kontrahieren die Leute es?

Sie können die Amöbe nicht bekommen, indem Sie einfach das Wasser beim Schwimmen schlucken, �r kann tödlich sein, wenn Sie die Nase hochdrücken, wie es beim Tauchen, Wasserskifahren oder anderen Wasseraktivitäten vorkommen kann,” nach North Carolina’s Department des Gesundheits- und Sozialwesens.

VERWANDTES VIDEO: Was Sie über Naegleria Fowleri, die gehirnfressende Amöbe wissen müssen

Woher weiß ich, ob ich es habe?

Die Symptome der hirnfressenden Amöbe beginnen im Allgemeinen ein bis neun Tage nach der nasalen Exposition und viele Menschen sterben laut CDC innerhalb von 18 Tagen nach dem Auftreten von Symptomen. Dazu zählen im ersten Stadium starke Kopfschmerzen, Fieber, Übelkeit und Erbrechen, im zweiten Stadium ein steifer Nacken, Krampfanfälle, veränderter Geisteszustand, Halluzinationen und ein Koma. Leider ist PAM, die durch die Amöbe verursachte Infektion, aufgrund des schnellen Fortschreitens der Krankheit letztlich schwer zu erkennen. Die Diagnose wird in der Regel postmortal gestellt.

Testen Beamte in Gewässern auf Amöben?

Die CDC empfiehlt nicht, Gewässer auf hirnfressende Amöben zu testen, da sie natürlich vorkommen, was bedeutet, dass es keinen etablierten Zusammenhang zwischen dem Nachweis oder der Konzentration von Naegleria fowleri und dem Infektionsrisiko gibt, sagte Chamorro.

Das Testen von Wasser gibt den Menschen nicht alle Informationen, die sie benötigen, um eine fundierte Entscheidung zu treffen, bevor sie in einem Gewässer schwimmen.

𠇎s könnte ein falsches Gefühl von Sicherheit vermitteln,”, sagte sie. 𠇊uf der einen Seite eines Sees kann es Amöben geben, auf der anderen jedoch nicht. Es kann auch in Sedimenten gefunden werden.”

Sie fügt hinzu, “Schilder, die vor Amöben warnen, werden aus diesem Grund normalerweise nicht in der Nähe von Gewässern platziert.”

Was kann ich tun, um Amöben zu vermeiden?

Obwohl eine Infektion selten ist, gibt es derzeit keine Methode, um die Anzahl der Amöben im Wasser zu reduzieren. Auf ihrer Website sagt die CDC, dass es aus diesem Grund ȁUnklar ist, wie ein Standard zum Schutz der menschlichen Gesundheit festgelegt werden könnte und wie Beamte des öffentlichen Gesundheitswesens einen solchen Standard messen und durchsetzen würden.”

Die einzige garantierte Möglichkeit, eine hirnfressende Amöbeninfektion zu vermeiden, besteht darin, auf wasserbezogene Aktivitäten in warmem Süßwasser zu verzichten. “Jeder, der gerne Zeit in einem Gewässer hat, sollte sich die Nase bedecken, bevor er hineingeht, oder Nasenklammern verwenden,”, sagt Chamorro. 𠇊s solange sie ihren Kopf nicht unter Wasser halten, geht es ihnen gut.”


Kostenlose lebende Amebic-Infektionen

Frei lebende Amöben der Gattungen Akanthamöben, Balamuthia, Naegleria und Sappinien sind seltene Krankheitsursachen bei Mensch und Tier.

Akanthamöben spp. und Balamuthia mandrillaris sind frei lebende Amöben, die eine granulomatöse Amöbenenzephalitis (GAE) verursachen können. Akanthamöben ist eine wichtige Ursache für schwere Keratitis bei Kontaktlinsenträgern und kann auch Hautläsionen verursachen, insbesondere bei immungeschwächten Personen. Da die Identifizierung auf Artenebene normalerweise nicht an Akanthamöben Fällen ist das gesamte Spektrum der pathogenen Arten innerhalb der Gattung nicht bekannt, aber Arten, von denen bekannt ist, dass sie den Menschen infizieren, umfassen A. byersi, A. castellanii, A. culbertsoni, A. hatchetti, A. healyi, A. astroonyxix, A. divionensis und A. polyphaga. B. mandrillaris kann auch in Verbindung mit Hautläsionen auftreten. Naegleria fowleri verursacht eine akute und in der Regel tödliche Erkrankung des zentralen Nervensystems (ZNS), die als primäre Amöben-Meningoenzephalitis (PAM) bezeichnet wird. Sappinia pedata wurde mit einem menschlichen Fall von Amöbenenzephalitis in Verbindung gebracht.

Lebenszyklus

Akanthamöben spp.

Akanthamöben spp. sind in der Umwelt allgegenwärtig und wurden an einer Vielzahl von Standorten gefunden, einschließlich Boden frisches, Brack- und Meerwasser Feldgemüse Abwasser Schwimmbäder Kontaktlinsenversorgung medizinische Pools Zahnbehandlungseinheiten Dialysegeräte Heizungs-, Lüftungs- und Klimaanlagen und Leitungswasser Säugetierzellkulturen und Gemüse. Akanthamöben hat zwei Stadien Zysten und Trophozoiten in seinem Lebenszyklus und es fehlt ein Flagellatenstadium. Die Trophozoiten replizieren durch Mitose (Kernmembran bleibt nicht intakt) . Die Trophozoiten sind die infektiösen Formen, obwohl sowohl Zysten als auch Trophozoiten in den Körper eindringen können durch verschiedene Mittel. Der Eintritt kann durch das Auge erfolgen , die Nasenwege zu den unteren Atemwegen oder ulzerierte oder verletzte Haut . Wann Akanthamöben spp. ins Auge gelangt, kann es bei ansonsten gesunden Personen, insbesondere bei Kontaktlinsenträgern, zu schwerer Keratitis führen . Wenn es in die Atemwege oder durch die Haut gelangt, kann es durch hämatogene Verbreitung in das Zentralnervensystem eindringen und eine granulomatöse Amöbenenzephalitis (GAE) verursachen. oder verbreitete Krankheit oder Hautläsionen bei Personen mit geschwächtem Immunsystem. Beide Akanthamöben spp. Zysten und Trophozoiten finden sich im Gewebe.

Balamuthia mandrillaris

Balamuthia mandrillaris wurde aus Erde und Staub sowie aus Autopsieproben infizierter Menschen und Tiere isoliert. B. mandrillaris hat zwei Stadien, Zysten und Trophozoiten in seinem Lebenszyklus und es fehlt ein Flagellatenstadium. Die Trophozoiten replizieren durch Mitose (Kernmembran bleibt nicht intakt) . Die Trophozoiten sind die infektiösen Formen, obwohl sowohl Zysten als auch Trophozoiten in den Körper eindringen durch verschiedene Mittel. Der Eintritt kann durch die Nasengänge in die unteren Atemwege erfolgen oder ulzerierte oder verletzte Haut . Wann B. mandrillaris in die Atemwege oder über die Haut gelangt, kann es durch hämatogene Ausbreitung in das Zentralnervensystem eindringen und eine granulomatöse Amöbenenzephalitis (GAE) verursachen. oder verbreitete Krankheit oder Hautläsionen . B. mandrillaris Zysten und Trophozoiten werden im Gewebe gefunden, einige Fälle wurden mit der Transplantation solider Organe von einem infizierten Spender in Verbindung gebracht.

Naegleria fowleri

Naegleria fowleri hat drei Stadien in seinem Lebenszyklus: Zysten , Trophozoiten und begeißelte Formen . Die Trophozoiten vermehren sich durch Promitose (Kernmembran bleibt intakt) . N. fowleri kommt in Süßwasser, Boden, Abwärme von Kraftwerken, geothermischen Brunnen und schlecht gechlortem Freizeit- und Leitungswasser vor. Trophozoiten können sich in zeitweilige, nicht fressende Geißelformen verwandeln, die normalerweise in das Trophozoitenstadium zurückkehren. Trophozoiten infizieren Menschen oder Tiere, indem sie die Nasenschleimhaut durchdringen, meist während des Schwimmens oder der Nasennebenhöhlenspülung , und ins Gehirn migrieren über die Riechnerven, die eine primäre Amöben-Meningoenzephalitis (PAM) verursachen. Naegleria fowleri Trophozoiten werden in Liquor (CSF) und Gewebe gefunden, während begeißelte Formen gelegentlich in Liquor gefunden werden. Zysten sind im Hirngewebe nicht zu sehen.

Gastgeber

Es gibt keinen wichtigen Reservoirwirt, da diese Amöbenarten frei in der Umwelt leben und nur opportunistisch parasitieren. Solche Infektionen wurden jedoch bei einer Vielzahl von Tierarten dokumentiert.

Geografische Verteilung

Diese Amöben kommen weltweit in Wasser und Boden vor. Nachfolgend finden Sie eine Zusammenfassung der Orte, an denen Infektionen beim Menschen bekannt sind:

Akanthamöbenspp.: Akanthamöben-assoziierte Keratitis tritt weltweit überwiegend bei Kontaktlinsenträgern auf. Fälle von Akanthamöben-assoziierte GAE wurden ebenfalls allgemein berichtet.

Balamuthia mandrillaris: Berichte von B. mandrillaris Infektionen stammen hauptsächlich aus Amerika, insbesondere Lateinamerika, mit begrenzten Fällen aus Asien, Australien und Europa. In den Vereinigten Staaten wurden viele Fälle aus südwestlichen Bundesstaaten gemeldet. Viele aus Peru gemeldete Fälle betrafen die Entwicklung von Hautläsionen im Gesicht.

Naegleria fowleri: Auf allen bewohnten Kontinenten wurden Fälle gemeldet. Die meisten Fälle in den Vereinigten Staaten wurden mit der Exposition gegenüber warmem Süßwasser in den Südstaaten in Verbindung gebracht. In den Sommermonaten wurden jedoch Fälle aus nördlichen Bundesstaaten gemeldet.

Der einzige gemeldete Infektionsfall mit Sappinia pedata in einem Menschen wurde in Texas identifiziert.

Klinische Präsentation

Akanthamöben spp.: Eine disseminierte Infektion zeigt sich typischerweise als Entzündung der Lunge oder der Nebenhöhlen und/oder Hautinfektionen, kann sich aber auf das Gehirn ausbreiten. GAE hat einen chronischen Beginn, der sich über einen Zeitraum von Wochen bis Monaten fortschreitend verschlechtert. Die Anzeichen und Symptome sind typisch für Meningoenzephalitis und Enzephalitis und beinhalten unterschiedlich starke neurologische Beeinträchtigungen. Es gibt nur sehr wenige bekannte Überlebende von GAE.

Akanthamöben Keratitis ist am häufigsten einseitig und individuelle Augensymptome sind variabel. In der Iris kann ein charakteristisches zirkuläres Stromainfiltrat sichtbar werden. Hornhautulzerationen und Narbenbildung können auftreten, wenn sie nicht behandelt werden. Obwohl stark mit der Verwendung von Kontaktlinsen in Verbindung gebracht, sind Fälle ohne Kontaktlinsen aufgetreten.

Die kutane Akanthamebiasis präsentiert sich als einzelne oder disseminierte chronische Hautläsionen, die am häufigsten verkrustet oder ulzeriert sind, sie können verhärtet sein oder einen Schorf aufweisen. Hautinfektionen verursacht durch Akanthamöben können als rötliche Knötchen, Hautgeschwüre oder Abszesse in der Haut auftreten. Die Läsionen können mit Pilz- oder mykobakteriellen Hautinfektionen, kutane Amöbiasis durch Entamoeba histolytica oder kutane Leishmaniose. Diese können mit oder ohne gleichzeitige Erkrankung des zentralen Nervensystems auftreten.

Balamuthia mandrillaris: Infektion mit B. mandrillaris beinhaltet einen ähnlichen Kurs wie Akanthamöben-zugehörigen GAE. Die Krankheit kann zunächst mild erscheinen, kann sich aber über Wochen bis mehrere Monate verschlimmern. Häufig verläuft die Krankheit tödlich mit einer Sterblichkeitsrate von mehr als 89%. Plaqueartige Hautläsionen, am häufigsten im Gesicht, insbesondere im Wangen- oder Nasenbereich, manchmal aber auch am Rumpf oder an den Gliedmaßen, können der Entwicklung neurologischer Symptome Wochen oder Monate vorausgehen.

Naegleria fowleri: PAM ist durch eine schwere ZNS-Dysfunktion mit schneller Degeneration gekennzeichnet, die durch eine hämorrhagisch-nekrotisierende Meningoenzephalitis verursacht wird. Im Gegensatz zu GAE treten die PAM-Symptome schnell nach einer Infektion auf (1-9 Tage im Median 5 Tage nach dem Schwimmen oder einer anderen nasalen Exposition gegenüber Naegleria-haltiges Wasser). Die Symptome ähneln denen einer bakteriellen Meningitis, mit der sie oft verwechselt wird, mit sich verschlechternden neurologischen Funktionen und Komplikationen. Die Todesfallrate ist extrem hoch.

Akanthamöben spp. Zysten.

Die Zysten von Akanthamöben spp. haben typischerweise einen Durchmesser von 10 &mgr;25 &mgr;m. Die Zysten haben eine zweischichtige Wand mit Poren: eine faltige faserige Außenwand (Exozyste) und eine Innenwand (Endozyste), die sechseckig, kugelförmig, sternförmig oder polygonal sein kann. Zysten enthalten nur einen Kern mit einem großen Karyosom. Zysten können im Gehirn, in den Augen, in der Haut, in der Lunge und in anderen Organen gefunden werden.

Akanthamöben spp. Trophozoiten.

Trophozoiten von Akanthamöben spp. sind pleomorph und messen ungefähr 15&ndash45 µm. Sie haben oft mehrere stachelartige Fortsätze, die als Akanthapodien bezeichnet werden. Trophozoiten enthalten einen großen Kern mit einem großen, zentral angeordneten Karyosom, aber kein peripheres Chromatin. Es gibt kein begeißeltes Trophozoitenstadium in Akanthamöben spp.

Balamuthia mandrillaris Zysten.

Die Zysten von Balamuthia mandrillaris sind morphologisch denen von sehr ähnlich Akanthamöben spp. und haben typischerweise auch einen Durchmesser von 10 &mgr;25 &mgr;m (im Mittel 15 &mgr;m). Diese sind in der Regel nicht zuverlässig zu unterscheiden Akanthamöben spp. ohne molekulare Bestätigung oder Elektronenmikroskopie. Die Zysten haben zwei lichtmikroskopisch sichtbare Wände und keine Poren: eine faltige fibröse Außenwand (Exozyste) und eine Innenwand (Endozyste), die in ihrer Form variieren können. Eine dritte Schicht (Mesozyste) ist nur elektronenmikroskopisch sichtbar. Zysten enthalten nur einen Kern mit einem großen Karyosom. Zysten können im Gehirn, in der Haut, in der Lunge und in anderen Organen gefunden werden.

Balamuthia mandrillaris Trophozoiten.

Trophozoiten von Balamuthia mandrillaris sind pleomorph und messen ungefähr 15&ndash60 µm. Sie produzieren oft lange Pseudopodien (breiter als die von Akanthamöben spp.). Trophozoiten enthalten einen großen Kern mit einem großen, zentral angeordneten Karyosom, aber kein peripheres Chromatin. Zweikernige Formen sind selten. Es gibt kein begeißeltes Trophozoitenstadium in B. mandrillaris.

Naegleria fowleri Zysten.

Naegleria fowleri bildet keine Zysten im menschlichen Gewebe. Zysten in der Umgebung und Kultur sind kugelförmig, haben einen Durchmesser von 7-15 &mgr;m und haben eine glatte, einschichtige Wand. Zysten haben einen einzigen Kern.

Naegleria fowleri Trophozoiten.

Es gibt zwei Formen von Trophozoiten in Naegleria fowleri: Amöboide und Amöboflagellat, wobei letzteres beim Menschen nur selten (innerhalb der Liquor) vorkommt. Die amöboiden Trophozoiten messen 10-35 &mgr;m, aber wenn sie gerundet sind, haben sie normalerweise einen Durchmesser von 10 &mdash15 µm. In Kultur können Trophozoiten über 40 &mgr;m wachsen. Das Zytoplasma ist körnig und enthält viele Vakuolen. Der einzelne Kern ist groß und hat ein großes, dichtes Karyosom und es fehlt an peripherem Chromatin.

Sappinien spp. Zysten und Trophozoiten.

Sappinien ist eine Gattung freilebender Amöben, die selten aus menschlichen Exemplaren isoliert werden. Die Gattung kommt weltweit vor und wurde im Kot vieler Tiere, darunter Säugetiere und Reptilien, isoliert. Zysten und Trophozoiten besitzen beide zwei Kerne.

Indirekter Immunfluoreszenztest (IIF) für frei lebende Amöbeninfektionen.

Makropathologische Bilder bei freilebenden Amöbeninfektionen.

Labor Diagnose

Acanthamoeba spp.: Akanthamöben Eine Infektion kann durch den Nachweis von Trophozoiten und Zysten bei der mikroskopischen Untersuchung von gefärbten Abstrichen von Biopsien (Gehirngewebe, Haut, Hornhaut) oder von Hornhautabschabungen diagnostiziert werden. Lactophenolblau-, Acridinorange-, Silber- und Calcofluorweiß-Färbungen wurden bei der Diagnose von Akanthamöbiasis in histologischen Schnitten und Umgebungsproben (d. h. Inhalt von pelletierten Kontaktlinsenbehältern) verwendet. Bei granulomatöser Amöbenenzephalitis werden Trophozoiten und Zysten im Liquor nur selten gefunden. Akanthamöben kann aus klinischen und Umweltproben im Labor auf nährstofffreiem Agar mit einer Page&rsquos-Kochsalzlösung kultiviert werden und Escherichia coli überlagern.

Auch die konfokale Mikroskopie oder Kultivierung des Erregers und seine Identifizierung durch direkte Immunfluoreszenz-Antikörper können sich als nützlich erweisen. Bei einer großen Anzahl von Zysten und/oder Trophozoiten, wie in sehr schweren Fällen, kann eine Diagnose durch direkte Mikroskopie an Hornhautabschabungen oder kontaminierten Oberflächen (z. B. Kontaktlinsenbehälter) möglich sein. Für den Nachweis und die Identifizierung von freilebenden Amöbeninfektionen in den oben aufgeführten klinischen Proben werden immer mehr PCR-basierte Techniken (konventionelle und Real-Time-PCR) beschrieben. Solche Techniken können in ausgewählten diagnostischen Referenzlaboratorien verfügbar sein.

Balamuthia mandrillaris Eine Infektion wird in der Regel postmortal diagnostiziert. Außerhalb des molekularen Nachweises mittels PCR und neuerdings auch der metagenomischen Tiefensequenzierung B. mandrillaris wird am zuverlässigsten durch Immunfluoreszenz- oder Immunperoxidase-Färbung von Gewebeproben nachgewiesen.

Zum Naegleria fowleri Infektionen kann die Diagnose durch mikroskopische Untersuchung des Liquor (CSF) gestellt werden. Es kann möglich sein, bewegliche Trophozoiten auf einem nassen Berg zu erkennen, und ein Giemsa-gefärbter Abstrich zeigt Trophozoiten mit typischer Morphologie. PCR kann verwendet werden, um Beweise für N. fowleri in Liquor und Hirngewebe. Amöbenkultur auf nährstofffreien Agarplatten, überlagert mit einem feinen Rasen von Escherichia coli erhöht die Wahrscheinlichkeit des Nachweises durch mikroskopische Methoden. (Mehr zur Diagnose von N. fowleri Infektionen).

Echtzeit-PCR

Zur Identifizierung von wurde am CDC eine Real-Time-PCR entwickelt Akanthamöben spp., Naegleria fowleri, und Balamuthia mandrillaris in klinischen Proben. * Dieser Assay zielt auf 18S-Gensequenzen der kleinen ribosomalen RNA-Untereinheit ab und verwendet unterschiedliche Primer und TaqMan-Sonden für die gleichzeitige Identifizierung und Differenzierung dieser drei Parasiten.

* Qvarnstrom Y, Visvesvara GS, Sriram R, da Silva AJ. Multiplex-Echtzeit-PCR-Assay zum gleichzeitigen Nachweis von Akanthamöben spp., Balamuthia mandrillaris, und Naegleria fowleri. J Clin Microbiol 200644(10):3589-3595.

Laborsicherheit

Frei lebende Amöben könnten ein potenzielles Sicherheitsrisiko für das Laborpersonal darstellen, insbesondere wenn eine große Zahl in Kultur vorhanden ist. Persönliche Schutzausrüstung (Laborkittel und Handschuhe mit Augenschutz) sollte jederzeit getragen und andere geeignete BSL-2-Vorkehrungen getroffen werden. Personen mit immunsuppressiven Erkrankungen oder offenen Wunden in exponierten Hautbereichen können bei der Arbeit mit Kulturen frei lebender Amöben einem höheren Infektionsrisiko ausgesetzt sein.

Vorgeschlagene Literatur

Naegleria fowleri: Siddiqui, R., Ali, I.K.M., Cope, J.R. und Khan, N.A., 2016. Biologie und Pathogenese von Naegleria fowleri. Acta Tropica, 164, S. 375-394.
Weitere Informationen und FAQ zu Naegleria fowleri

Akanthamöben spp.: Lorenzo-Morales, J., Khan, N.A. und Walochnik, J., 2015. Ein Update zu Akanthamöben Keratitis: Diagnose, Pathogenese und Behandlung. Parasit, 22.
Weitere Informationen und FAQ zu Akanthamöben spp.

Balamuthia mandrillaris: Lorenzo-Morales, J., Cabello-Vílchez, A.M., Martín-Navarro, C.M., Martínez-Carretero, E., Pintildeero, J.E. und Valladares, B., 2013. Is Balamuthia mandrillaris ein öffentliches Gesundheitsproblem weltweit?. Trends in der Parasitologie, 29(10), S. 483-488.
Weitere Informationen und FAQ zu Balamuthia mandrillaris

Sappinien spp.: Walochnik, J., Wylezich, C. und Michel, R., 2010. Die Gattung Sappinien: Geschichte, Phylogenie und medizinische Relevanz. Experimentelle Parasitologie, 126(1), S. 4-13.


Mikrobiologen von reddit, wenn die Amöbe Naegleria Fowleri so häufig in Seen, Boden, Wasser und Menschen in engem Kontakt mit ihr vorkommt, warum ist es dann so schwer, sich damit anzustecken?

Ich weiß, dass man sich das Wasser in die Nase pumpen muss, aber ich nehme an, es gibt jedes Jahr Tausende von Menschen, die Wasser aus Seen (in denen die Amöbe gedeiht) durch die Nase holen. Ich habe viele Artikel darüber gelesen, aber keine klare Erklärung, warum es so selten ist. Muss es viel Wasser sein? Nur ein Spritzer? Könnte man mit der Amöbe nicht Dampf einatmen?

Edit: Danke für die Antworten! Es gibt viele sensationelle Artikel und wenig wissenschaftliche Informationen. Ich wollte eine gute kleine Diskussion zu dem Thema führen, um etwas so Seltenes ein bisschen besser zu verstehen. Außerdem habe ich eine Freundin, die sich ständig Sorgen macht, wenn sie eine Wasserpfütze, einen Fluss, einen See usw. sieht, und ich möchte einige solide Argumente haben, um sie zu beruhigen.

Es ist ein Opportunist (er lebt glücklich allein, braucht uns nicht) und es ist wirklich ziemlich schwierig, sich anzustecken. Die Amöbe muss über die Riechnerven durch eine knöcherne Platte zum Gehirn gelangen.

Die Aktivitäten mit dem höchsten Risiko sind, wenn Wasser gewaltsam in die Nase geschossen wird. Der Klassiker ist, dass jemand vom Wasserski auf einem See fällt, obwohl es in jüngerer Zeit Fälle gab, in denen Geräte wie Netti-Töpfe mit nicht sterilem Wasser verwendet wurden.

Interessant habe ich gelesen, wie man sich das Wasser in die Nase schieben muss. Wäre die knöcherne Platte der Grund dafür? Wie in, das Wasser muss eingeatmet werden, damit das Wasser diese Platte beschädigt? Oder können sich die Amöben davon ernähren?

Hi. Diese Scheiße ist meine Marmelade, aber denken Sie daran, dass ich nicht in offizieller Funktion spreche. Ich möchte zuerst mit Ihrer letzten Frage beginnen: Theoretisch könnte Sie ja nur ein Spritzer bekommen. Murine-Modelle haben eine infektiöse Belastung von nur einer einzigen Amöbe nachgewiesen. Es wurde festgestellt, dass die Zysten in der Luft sind, aber Naegleria ist nicht dafür bekannt, dass sie in menschlichem Gewebe exzysiert (ich denke, verzeihen Sie, ich habe meine Endnote nicht zu Hause), daher ist der Dampf wahrscheinlich keine große Sache. Ich würde auch vermuten, dass eine Art osmotischer Schock notwendig ist, um die Infektion zu verursachen, weil dies die Ausflagellation verursacht. Die begeißelte Form frisst nicht, ist aber wahrscheinlich notwendig, damit diese kleinen Höllen so weit in die Nasenhöhle gelangen, wie sie es brauchen, um zu kauen. Die Trophozoiten bewegen sich ziemlich gut, aber die begeißelten Formen buchen es verdammt noch mal. Außerdem brauchen sie, wie in anderen Antworten erwähnt, ziemlich warmes Wasser, um sich überhaupt aktiv zu vermehren, und Zysten unterliegen viel stärker der Austrocknung als echte Amöben.


Während Sie im Sommer klingeln, vergessen Sie nicht, sich an die Bedeutung dessen zu erinnern, was wir haben.

Heimat der Freien wegen der Mutigen.

"Die amerikanische Flagge weht nicht, weil der Wind sie bewegt. Sie weht vom letzten Atemzug jedes Soldaten, der sie beschützt."

An diesem Tag haben wir in Amerika derzeit über 1,4 Millionen mutige Männer und Frauen, die aktiv in den Streitkräften eingetragen sind, um unser Land zu schützen und zu dienen.

Derzeit gibt es eine erhöhte Rate von 2,4 Millionen Rentnern des US-Militärs

Ungefähr 3,4 Millionen Soldaten starben in Kriegen.

Jedes Jahr freuen sich alle auf das Memorial Day Weekend, ein Wochenende, an dem die Strände überfüllt sind und die Leute ihre Grills für ein lustiges sonniges BBQ anzünden, einfach eine Zunahme der Sommeraktivitäten, als "Pre-Game", bevor der Sommer beginnt.

Viele Amerikaner haben die wahre Definition vergessen, warum wir das Privileg haben, den Memorial Day zu feiern.

Einfach ausgedrückt, ist der Memorial Day ein Tag, um innezuhalten, sich zu erinnern, zu reflektieren und die Gefallenen zu ehren, die gestorben sind, um alles zu beschützen und zu dienen, was wir heute tun können.

Danke, dass Sie nach vorne getreten sind, wenn die meisten zurückgetreten wären.

Danke für die Zeit, die ihr mit euren Familien verpasst habt, um meine zu schützen.

Danke, dass Sie sich einbringen, wissend, dass Sie sich zu Ihrem eigenen Schutz auf den Glauben und die Gebete anderer verlassen müssen.

Danke, dass Sie so selbstlos sind und Ihr Leben aufs Spiel setzen, um andere zu schützen, obwohl Sie sie überhaupt nicht kannten.

Vielen Dank, dass Sie sich durchgehalten haben und uns ehrenamtlich vertreten haben.

Vielen Dank für Ihren Einsatz und Ihre Sorgfalt.

Ohne Sie hätten wir nicht die Freiheit, die uns jetzt gewährt wird.

Ich bete, dass Sie diese gefaltete Flagge nie bekommen. Die Flagge ist gefaltet, um die ursprünglichen dreizehn Kolonien der Vereinigten Staaten darzustellen. Jede Falte trägt ihre eigene Bedeutung. Laut Beschreibung symbolisieren einige Falten Freiheit, Leben oder zollen Müttern, Vätern und Kindern derer, die in den Streitkräften dienen, Tribut.

Beten Sie, solange Sie leben, für die Familien, denen diese Flagge übergeben wird, weil jemand gerade eine Mutter, einen Ehemann, eine Tochter, einen Sohn, einen Vater, eine Frau oder einen Freund verloren hat. Jeder Mensch bedeutet jemandem etwas.

Die meisten Amerikaner haben noch nie in einem Krieg gekämpft. Sie haben nie ihre Stiefel geschnürt und sind in den Kampf gegangen. Sie mussten sich bis zum nächsten Tag keine Sorgen um ihr Überleben machen, als um sie herum Schüsse losgingen. Die meisten Amerikaner wissen nicht, wie diese Erfahrung ist.

Einige Amerikaner kämpfen jedoch jeden Tag für unser Land. Wir müssen diesen Amerikanern danken und uns daran erinnern, weil sie für unser Land kämpfen, während der Rest von uns zu Hause und außerhalb des Kriegsgebiets sicher bleibt.

Nehmen Sie niemals an, dass Sie hier sind, weil jemand dafür gekämpft hat, dass Sie hier sind, und vergessen Sie nie die Menschen, die gestorben sind, weil sie Ihnen dieses Recht gegeben haben.

Wenn Sie also dieses Wochenende feiern, trinken Sie auf diejenigen, die heute nicht bei uns sind, und vergessen Sie nicht die wahre Definition, warum wir jedes Jahr den Memorial Day feiern.

"...Und wenn Worte die Schuld, die wir diesen Männern schulden, nicht zurückzahlen können, müssen wir uns mit unseren Taten sicherlich bemühen, ihnen die Treue zu halten und mit der Vision, die sie zum Kampf und zum letzten Opfer führte."


Amöben-Proteus

Amöben-Proteus ist ein mikroskopischer Organismus mit einer großen Zelle. Es ist bei den meisten Wissenschaftslieferanten erhältlich, die lebende Organismen verkaufen, und wird oft von Schulen verwendet. In der Natur lebt es in Süßwasserkörpern wie Teichen. Es ernährt sich von kleineren einzelligen Lebewesen, Algen und Rädertierchen. Rädertiere sind vielzellige Lebewesen, aber kleiner als viele einzellige. Es gibt noch andere Amöben im Teichwasser, aber Amöbe proteus ist aufgrund seiner Größe gut für die Schüler zu beobachten. Dies wird im Video unten gezeigt.

Fütterung

Eine Amöbe scheint Pseudopodien absichtlich auszudehnen, wenn sie versucht, ihre Beute zu fangen, aber tatsächlich reagiert sie auf spezifische Reize, die durch die Anwesenheit der Beute erzeugt werden. Forscher haben entdeckt, dass Pseudopodien aufgrund einer Vielzahl von Reizen produziert werden, einschließlich chemischer Gradienten, Temperaturgradienten und elektrischer Felder.

Die Amöbe streckt ihre Pseudopodien um und über ihre Beute aus und fängt sie in einem Wassertropfen ein. Die Zellmembran der Amöbe umgibt schließlich die Beute von allen Seiten und bildet eine Nahrungsvakuole, die in den Amöbenkörper eingebaut wird. Diese Art der Fütterung wird Phagozytose genannt. Sobald die Beute gefangen ist, gelangen Verdauungsenzyme in die Nahrungsvakuole. Diese töten die Beute und verdauen sie

Die Leute sind manchmal erstaunt, dass eine so langsame Kreatur wie eine Amöbe so schnell schwimmende Kreaturen wie die im obigen Video gezeigten fangen kann. Die mangelnde Geschwindigkeit der Amöbe ist tatsächlich ein Vorteil, da ihre Beute möglicherweise nicht erkennt, dass sie umzingelt ist.

Reproduktion

Amöben-Proteus reproduziert durch einen Prozess namens binäre Spaltung, die eine Art der asexuellen Reproduktion ist. Zuerst teilt sich der Zellkern in zwei Kerne und dann teilt sich die Zelle in zwei Zellen. Ein Kern geht in jede der "Tochter"-Zellen, die sich bald auf die Größe der Elternzelle vergrößern.

Die folgenden Informationen dienen dem allgemeinen Interesse. Jeder mit ungeklärten, schwerwiegenden oder wiederkehrenden Krankheitssymptomen sollte zur Diagnose und Behandlung einen Arzt aufsuchen. Der Arzt wird in der Lage sein, Menschen und Fragen zur Krankheit zu beantworten.


Eine durch Naegleria fowleri verursachte Infektion wird oft mit einer bakteriellen oder viralen Meningitis verwechselt. Der Zustand ist aufgrund seiner unspezifischen Frühsymptome schwer zu diagnostizieren. Um den Zustand zu diagnostizieren, verwendet der Arzt die folgenden Tests:

  • Direkte Visualisierung: Bei der Methode wird Liquor (Liquor) aus dem Körper des Patienten entnommen und unter dem Mikroskop untersucht, um die Amöbe zu identifizieren.
  • Antigen-Nachweis: Dies ist ein schneller Prozess, bei dem Antikörper verwendet werden, um das Vorhandensein von Antigenen im Gewebe nachzuweisen [9].
  • Polymerase-Kettenreaktionstest: Ein Test, bei dem ein spezifisches molekulares Werkzeug verwendet wird, um die DNA der Amöbe zu amplifizieren, um sie leicht zu identifizieren [10].

Andere Tests umfassen CT-Scan und MRT, um die Schwellung im Gehirn zu erkennen.


Naegleria Amöbe

Wie wir zukünftige Schwimmer im Havasu .-See schützen können

In den letzten Nachrichten war die tragische Geschichte eines jungen Lake Havasu-Teenagers, der an einer tödlichen Infektion mit Naegleria fowleri, einer freilebenden Amöbe, die häufig in Warmwasserseen vorkommt, starb.

Wir haben ein paar Anrufe und E-Mails erhalten, in denen wir gefragt wurden, ob es gefährlich sei, im Lake Havasu zu schwimmen, und ob sie einen neuen Süßwassersee finden sollten. Unsere Antwort, wenn Sie die Naegleria fowleri komplett meiden möchten, dann meiden Sie ALLE Warmwasserseen, heißen Quellen, Teiche, Flüsse und ein paar Schwimmbäder.

Das ist natürlich etwas drastisch und nach Informationen der Experten unnötig. Ja, Sie können sicher im Lake Havasu und anderen warmen Gewässern schwimmen, aber es gibt einige Dinge, die Sie wissen müssen.

Trotz der Tatsache, dass die Naegleria fowleri weltweit zu finden ist, einschließlich der meisten Süßwasserseen in den Vereinigten Staaten, sind Infektionen äußerst selten. Einer Quelle zufolge wurden zwischen 1995 und 2004 nur 23 Fälle in den USA dokumentiert.

Naegleria Amoeba ist nicht auf ein bestimmtes Lokal beschränkt

Diese Amöbe kommt häufig in warmen, seichten und stehenden Gewässern vor. Wie warm ist warm? 80 Grad und höher ist die Temperatur in Artikeln, die ich gelesen habe.

Allerdings reicht es nicht aus, einfach in warmem Wasser zu schwimmen, um ein Problem zu verursachen. Die Amöbe muss durch die Nase in den Körper gelangen, und laut Literatur muss sie über einen heftigen Wasserstrahl, wie zum Beispiel beim Tauchen, in die Nase gelangen.

Tatsache ist, egal wo Sie sind, wenn das Wasser sehr warm ist, sich nicht bewegt und flach ist, werden einige unangenehme Dinge wachsen. Einfache Biologie.

Ich mag es nicht, meinen Kopf unter Wasser zu tauchen, aber wenn Kinder darauf bestehen, dass sie gewalttätige Schnitte machen wollen, würde ich kühlere Gewässer finden (was in Havasu in den wärmeren Monaten sogar möglich ist, indem man einfach den Standort wechselt) oder habe sie tragen einen Nasenclip.

Allerdings reicht es nicht aus, unter Wasser zu gehen, um sich anzustecken. Normalerweise muss die Amöbe gewaltsam in die Nase eingeführt werden, entweder durch Eintauchen ins Wasser oder auf andere Weise.

Was ist mit Wasserski, wenn Sie einen unerwarteten Ausrutscher erleiden? Normalerweise fahren wir in kühleren und tieferen Gewässern, wo die Amöbe normalerweise nicht zu finden ist.

Schützen Sie sich durch Bildung

Unterm Strich glaube ich, dass es wichtig ist, mögliche Gefahren zu verstehen, sich über die Bedrohung zu informieren und dann Maßnahmen zur Prävention zu ergreifen.

I know the father of the young teen who died stated he would never let his children swim in Lake Havasu again. I understand his feelings. If my child drowned in a particular swimming pool or body of water, I would never want to see that body of water ever again.

This particular threat, although extremely rare, is not unique to Lake Havasu. If our goal is to protect our families, we need to take certain precautions when visiting any fresh water lake or other bodies of water. In Havasu the weather is already cooling, which means our water temperatures are also dropping. But next summer, when those water temperatures get above 80 degrees, we should be wearing a nose clip if we want to swim with our heads under water or do any major cannon ball jumping.

What do experts have to say on this issue? According to a recent quote by Dr. Rebecca Suneshine, deputy state epidemiologist of the Arizona Department of Health, “I would swim in Lake Havasu…and I would let my children swim there.” She went on to say the infection was incredibly rare.

Bobbi Holmes, October 5, 2007

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5 comments on &ldquo Life threatening dangers of swimming during times of excessive heat: Naegleria fowleri amoeba &rdquo

Hi.
I’ve read several articles and done sum research on lake Havasu..
Summer time the heat in the LHC lake area is very hot..
So definitely a danger in that respect..
But at all times of the year you have algee..
Which comes up off the bottom of the lake in the shallows..
I’ve been coming hear for a number of years now..
Winter and summer..
I’ve experienced an ear infection the last couple of years.
I was to believe it was from camping in the desert.
Due to the wind that blows..kicking up dust and sand etc etc..
But apon further research..
I’m beginning to believe it’s caused due to me swimming almost daily in LHC..
One of the main reasons I come here..
Research for your self.
Things like.
Where does LHC get there drinking water.?
Where does the sewage go..
What can breed in the water and be there year round.
Is there a situation caused due to boats / and other water craft used in this lake.
Remember.. this a lake.
The water isn’t draining at a constant flow like a river..
I have noticed there’s a big sign at Waters edge that lights up and flashes.
That warns people not to go in the lake due to excess amounts of contamination..
Mostly due to water craft..I thinx.
Just FYI..
To each his own..
Thanx you very much.
I hope this helps in sum small way.

Our family first moved to Lake Havasu over fifty years ago. Growing up, I spent most of my days on the lake. In fact, when I was in high school, I drove a boat to school each day—by myself.

Lake Havasu is a water reservoir, providing drinking water for Southern California. It’s actually a very clean lake. While there might be some areas—like perhaps in the Channel where you get a high concentration of boats and people in a smaller area that might cause some issues—overall I believe it is a clean lake.

As for the deadly Naegleria fowleri amoeba, that can happen ANYWHERE when two conditions are present:
1. Excessive heat
2. Stagnant water

It’s certainly not an issue unique to Havasu, nor is it not something that should keep swimmers out of the lake. People just need to be smart about it.

When water temperature in any body of water exceeds 80 degrees, avoid certain activities in the back coves, where there is still or stagnate water. Those would include letting your kids do cannon balls, diving, or taking them skiing and tubing through those stagnate areas, for risk they be thrown off and into the water.

From what I have read, swimming alone in hot stagnate water is not the risk, it is having the water violently shoved up your ears.

Why would motor boats be allowed on any fresh water lake, esp. Drinking Water. Electric motors have been around for a long time.

Lake Havasu supplies water to several states. And there have always been motorboats allowed on it. Not uncommon. But the amoeba is an issue unrelated to boats. Heat and stagnate water. Actually, the motor boats stirring up the water might be a good thing.

Lake Havasu literally sits on a river the colorado river which opens their dams everyday which flows . It may be a called lake havasu but its not a lake in reality its the colorado river dammed up like the rest of it all the way to the Rockies.


Which of these diseases results in meningitis caused by an encapsulated yeast?

A. cryptococcosis
B. histoplasmosis
C. candidiasis
D. coccidiomycosis

What kind of stain is most commonly used to visualize the capsule of cryptococcus?

A. Gram stain
B. simple stain
C. negative stain
D. fluorescent stain

Which of the following is the causative agent of East African trypanosomiasis?

A. Trypanosoma cruzi
B. Trypanosoma vivax
C. Trypanosoma brucei rhodanese
D. Trypanosoma brucei gambiense

Which of the following is the causative agent of primary amoebic meningoencephalitis?

A. Naegleria fowleri
B. Entameba histolyticum
C. Amoeba proteus
D. Acanthamoeba polyphaga

What is the biological vector for African sleeping sickness?

A. mosquito
B. tsetse fly
C. deer tick
D. sand fly

How do humans usually contract neurocysticercosis?

A. the bite of an infected arthropod
B. exposure to contaminated cat feces
C. swimming in contaminated water
D. ingestion of undercooked pork

Which of these is the most important cause of adult onset epilepsy?

A. neurocysticercosis
B. neurotoxoplasmosis
C. primary amoebic meningoencephalitis
D. African trypanosomiasis


Materialen und Methoden

Ethik-Erklärung

The use of leftover CSF for making spiked samples was approved by the Ethics Committee of the Faculty of Tropical Medicine, Mahidol University (MUTM 2006–063) and the Ethics Review Committee for Research in Human Subjects, Ministry of Public Health, Thailand (Ref. No. 33/2550). A written informed consent form regarding the use of leftover CSF specimens for future research purposes was obtained from the patients. The CSF was completely anonymous and was not linked with the patients’ identification.

Parasites and bacteria

Naegleria fowleri, Naegleria gruberi, Akanthamöben spp., trophozoites, isolated from environmental samples from our previous study [17] and confirmed by morphology, culture, mouse pathogenicity and sequencing.

Giardia duodenalis—cysts, cultured and confirmed by PCR.

Cryptosporidium parvum—oocysts, cultured and confirmed by PCR.

Entamoeba histolytica—trophozoites, cultured and confirmed by PCR.

Entamoeba coli—cysts, detected by morphology.

Toxoplasma gondii—oocysts, kindly provided by Prof. Marie Laure Darde, University Hospital, Department of Parasitology, Biological Resource Centre for Toxoplasma, Limoges, France.

Neospora caninum—tachyzoites, cultured and confirmed by PCR.

Blastozystis—confirmed by sequencing.

Enterocytozoon bieneusi—confirmed by sequencing.

Escherichia coli—kindly provided by the Department of Microbiology and Immunology, Faculty of Tropical Medicine, Mahidol University.

Cryptococcus neoformans—kindly provided by Prof. Srisurang Tantimavanich, Department of Clinical Microbiology, Faculty of Medical Technology, Mahidol University.

Mycobacterium tuberculosis—strain H37Rv, kindly provided by the Central Chest Institute of Thailand.

LAMP primer design

A set of five primers for LAMP were designed according to the published sequence of n. fowleri virulence-related protein (GenBank accession no. M88397) [18] using PrimerExplorer ver. 4 (http://primerexplorer.jp/elamp4.0.0/index.html). A forward inner primer (FIP), a backward inner primer (BIP), two outer primers (F3 and B3) and a loop primer (LB) were used for the LAMP. The primers were aligned and checked for specificity using NCBI GenBank and comparative genome Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) analysis. The oligonucleotide primers were synthesized with High Affinity Purification by Bio Basic Inc. (Ontario, Canada). The sequences and lengths of the primers are shown in Table 1.

LAMP assay.

The LAMP conditions were optimized with different parameters, including the concentrations of outer primers (0.1 to 0.4 μM), inner primers (1.2 to 2.0 μM), loop primer (0.2 to 1.0 μM), MgSO4 (5 to 10 mM), dNTPmix (1 to 2 mM), hydroxy naphthol blue (HNB) (80–160 μM), betaine (0 to 1 M), enzyme (2 to 10 U), assay temperature (60, 62, or 64°C) and incubation time (60, 90, or 120 min). Nine parameters, not including incubation time, were optimized one at a time and each optimization experiment was repeated three times. A non-template control (sterile water) as negative control and a positive control (DNA extracted from 100 n. fowleri trophozoites) were included for each LAMP run. The results were considered positive when the LAMP product showed a significant difference between positive amplification, i.e., when color changes from violet to sky blue and negative amplification, which remains violet with the presence or absence of the ladder-like pattern bands after electrophoresis. On the basis of the above optimization steps, the final reaction mixture (25 μl) contained 0.2 M each of outer primer (F3, B3), 1.6 M each of inner primer (FIP, BIP), 0.8 M of loop primer (LB), 1X of supplied ThermoPol buffer, 8 mM MgSO4 (New England Biolabs, Ipswich, MA, USA), 1.4 mM dNTP mix (Thermo Scientific, Vilnius, Lithuania), 0.8 M betaine (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), 120 μM HNB (Sigma-Aldrich), 8 units of Bst DNA polymerase (New England Biolabs) with 2 μl total DNA as a template. Amplification was conducted at 64°C for 60 min and terminated at 80°C for 5 min.

Specificity of the LAMP primers.

To investigate LAMP primer specificity, DNA templates isolated from organisms described earlier were subjected to LAMP. In addition, DNA extracted from CSF from non-PAM patients and healthy human blood were included in the test. The specificity test was repeated twice. Negative controls were included for all experiments.

Determinations of lower limit of detection by LAMP and PCR in spiked CSF and water samples with pure cultures

The lower limit of detection of the LAMP assay was determined using known amounts of n. fowleri in pure cultures. The trophozoites were counted under a microscope with a hemocytometer and further serial 10-fold dilutions were prepared in phosphate buffered saline (PBS), ranging from 10 4 –1 cells. n. fowleri in each dilution was added into each 250 ml of water collected from a pond which was previously tested to be free of n. fowleri by microscopy and PCR, and 200 μl of pooled leftover CSF from non-PAM patients. CSF was obtained from HIV patients with neurological abnormalities. The water samples with cells were then centrifuged at 2,500 rpm for 10 min at 20°C as described by Puzon et al. [19]. Supernatant was discarded and samples resuspended in 1 ml of PBS, transferred to a 1.5 ml tube and reconcentrated by centrifugation at 10,000 rpm for 10 min at 20°C. Supernatant was then removed by pipette, before samples were resuspended in 200 μl PBS. Genomic DNA was extracted using a QIAamp DNA minikit (Qiagen, Hilden, Germany). LAMP sensitivity was compared with the conventional nested PCR method for n. fowleri [9]. Spiking experiments with different concentrations were repeated three times. In addition, another set of spiked water and CSF samples were subjected to DNA extraction using the heating method to compare the sensitivity obtained with DNA extraction by a commercial kit, to shorten the total completion time and to simplify the LAMP assay for the feasible diagnosis of field samples. The last dilution with all three samples testing positive was considered as the detection limit.

DNA extraction and PCR assays

Genomic DNA was purified from the organisms listed above for specificity testing, the spiked dilutions for sensitivity test and the water samples for validating the LAMP, using a QIAamp DNA minikit (Qiagen, Germany) per manufacturer’s protocol and the DNA was eluted in 100 μl TE buffer. 2 μl of the DNA template was used in LAMP and PCR. The extracted DNA was stored at -80°C until use.

For DNA extraction by heating method, 200 μl of each spiked water dilution was heated directly at 95°C for 10 min without the centrifugation and resuspension steps. The samples were then centrifuged at 14,000 rpm for 10 min and 2 μl of the supernatant was used as the DNA template.

Classical nested PCRs from previously published primers targeting Mp2Cl5 sequence [9] were selected to compare and evaluate the sensitivity and efficiency of the LAMP. The forward primer, Mp2Cl5.for (5’-TCTAGAGATCCAACCAATGG-3’) and the reverse primer, Mp2Cl5.rev (5’-ATTCTATTCACTCCACAATCC-3’) were used in the first round of PCR amplification, which contained 1X Taq buffer, 2.5 mM MgCl2, 0.6 μM each of primer, 0.2 mM each of dNTP (Thermo Scientific, Vilnius, Lithuania), 2.5 units of Taq DNA polymerase (Thermo Scientific, Vilnius, Lithuania), and 2 μl of extracted DNA. Reactions were cycled 35 times with first denaturation at 95°C for 5 min, followed by denaturation at 95°C for 1 min, annealing at 65°C for 1 min and extension at 72°C for 2 min. Die Mp2Cl5.for-in (5’-GTACATTGTTTTTATTAATTTCC-3’) and Mp2Cl5.rev-in (5’-GTCTTTGTGAAAACATCACC-3’) primers which amplified 110-bp fragment products were used for the nested PCR. The mixtures for the second PCR were the same as in the first round, except that the concentration of each primer was 0.5 μM. Two microliters of the PCR product from the first-round PCR were used in the second PCR. The LAMP and PCR products (7.5 μl) were analyzed by 2% agarose gel electrophoresis, stained with ethidium bromide, and observed under UV transillumination.

Collection of environmental water samples for n. fowleri Analyse

We conducted a survey for n. fowleri in Thailand to validate the applicability of the newly developed LAMP assay. Eighty water samples from different locations were collected from stagnant water around the houses and near the markets during the flooding crisis in Nakhon Pathom Province, Thailand, during November 2011. 30 water samples were collected from rivers, canals, rain (from a rainwater tank supplying a house), tap (from a public water distribution system), ground and underground water in Nan, Phayao, Kanchanaburi, Chantaburi, Trat, and Trang Provinces, Thailand, from January 2012 to December 2013 (S1 Fig). Samples were collected in sterile glass bottles and labeled with date, time, and place of collection. The water samples were processed in the manner described in US EPA Method 1623 with some modifications [20]. Briefly, 1,000 ml of water from each site were added to a sterile bottle and immediately sent to the laboratory. Each water sample was concentrated by multiple centrifugation steps (10 min at 3,500 rpm) and the pellet was resuspended in 1 ml of PBS, kept for DNA extraction using a QIAamp DNA minikit. Each sample was tested in triplicate by both LAMP and PCR assays.

All of the positive detection from environmental samples by LAMP were further tested for confirmation as n. fowleri by bidirectional sequencing of LAMP products [21]. To do this, 1 μl of LAMP product was used as template in a PCR reaction with primers that flank within the LAMP product of the n. fowleri virulence-related protein, F2 (5’- CAATGAAAGAAACTTTGCACCT-3’) and B2 (5’- TCCATCCATTTGGATCGG -3’) (0.3 μM each of primer), dNTPs (0.2 mM), Taq buffer (1X), MgCl2 (1.5 mM) and Taq DNA polymerase (1 unit) in final volume 25 μl. The reaction was run as follows: 2 minutes at 95°C, 35 cycles of 95°C 30 sec, 55°C for 30 sec, 72°C 30 sec, followed by 10 minutes extension at 72°C. The PCR product was run on an agarose gel, purified, and sequenced on an ABI3730xl DNA Analyzer (Applied Biosystems). The sequences were analyzed and identified using the MEGABLAST search program (http://www.ncbi.nlm.nih.gov) from the GenBank database.

Statistische Analyse

McNemar's test was used to test for differences between the LAMP and PCR detection rates. The test was 2-sided and exact probabilities were calculated. The agreement between LAMP and PCR was also calculated through the Kappa coefficient with 95% confidence level [22]. All analyses were conducted with SPSS for Windows 18.0 (SPSS Inc.).


The amoeba Naegleria fowleri, commonly found in warm swimming water, can cause a “brain-eating” disease that is almost always fatal. UCSD researchers have now identified a number of drugs able to inhibit its growth in the lab, including the breast cancer drug tamoxifen and antidepressant Prozac.

Prozac seems to have a lot of side uses and side effects discovered lately.

The title of the post is a copy and paste from the first two paragraphs of the linked academic press release here :

The amoeba Naegleria fowleri is commonly found in warm swimming pools, lakes and rivers. On rare occasions, the amoeba can infect a healthy person and cause severe primary amebic meningoencephalitis, a “brain-eating” disease that is almost always fatal. Other than trial-and-error with general antifungal medications, there are no treatments for the infection.

Researchers at Skaggs School of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences at University of California San Diego have now identified three new molecular drug targets in N. fowleri and a number of drugs that are able to inhibit the amoeba’s growth in a laboratory dish. Several of these drugs are already approved by the U.S. Food and Drug Administration for other uses, such as antifungal agents, the breast cancer drug tamoxifen and antidepressant Prozac.

Wenxu Zhou, Anjan Debnath, Gareth Jennings, Hye Jee Hahn, Boden H. Vanderloop, Minu Chaudhuri, W. David Nes, Larissa M. Podust.

Enzymatic chokepoints and synergistic drug targets in the sterol biosynthesis pathway of Naegleria fowleri.

PLOS Pathogens, 2018 14 (9): e1007245

Naegleria fowleri is a free-living amoeba that can also act as an opportunistic pathogen causing severe brain infection, primary amebic meningoencephalitis (PAM), in humans. The high mortality rate of PAM (exceeding 97%) is attributed to (i) delayed diagnosis, (ii) lack of safe and effective anti-N. fowleri drugs, and (iii) difficulty of delivering drugs to the brain. Our work addresses identification of new molecular targets that may link anti-Naegleria drug discovery to the existing pharmacopeia of brain-penetrant drugs. Using inhibitors with known mechanism of action as molecular probes, we mapped the sterol biosynthesis pathway of N. fowleri by GC-MS analysis of metabolites. Based on this analysis, we chemically validated two enzymes downstream to CYP51, sterol C24-methyltransferase (SMT, ERG6) and sterol Δ8−Δ7 -isomerase (ERG2), as potential therapeutic drug targets in N. fowleri. The sterol biosynthetic cascade in N. fowleri displayed a mixture of canonical features peculiar to different domains of life: lower eukaryotes, plants and vertebrates. In addition to the cycloartenol→ergosterol biosynthetic route, a route leading to de novo cholesterol biosynthesis emerged. Isotopic labeling of the de novo-synthesized sterols by feeding N. gruberi trophozoites on the U13C-glucose-containing growth medium identified an exogenous origin of cholesterol, while 7-dehydrocholesterol (7DHC) had enriched 13C-content, suggesting a dual origin of this metabolite both from de novo biosynthesis and metabolism of scavenged cholesterol. Sterol homeostasis in Naegleria may be orchestrated over the course of its life-cycle by a “switch” between ergosterol and cholesterol biosynthesis. By demonstrating the growth inhibition and synergistic effects of the sterol biosynthesis inhibitors, we validated new, potentially druggable, molecular targets in N. fowleri. The similarity of the Naegleria sterol Δ8−Δ7 -isomerase to the human non-opioid σ1 receptor, implicated in human CNS conditions such as addiction, amnesia, pain and depression, provides an incentive to assess structurally diverse small-molecule brain-penetrant drugs targeting the human receptor for anti-Naegleria activity.

Sterols are important constituents of cell membranes. In a unicellurar organism, such as the human pathogen N. fowleri, the cell membrane delineates the physical boundaries of the cell and mediates interactions of the organism with its environment. N. fowleri is a free-living amoeba that may infect the human brain causing a fulminant infection called primary amebic meningoencephalitis (PAM). PAM has resulted in death in >97% of reported cases. Understanding the molecular and cellular biology of N. fowleri will facilitate the rational development of new therapeutic interventions. Using inhibitors targeting different enzymatic steps in the sterol biosynthesis pathway, we mapped metabolic intermediates and delineated the biosynthetic routes contributing to N. fowleri sterol homeostasis. An array of sterol molecules suggests that two different sterol types, ergosterol-like and cholesterol-like sterols, co-exist and may be dynamically regulated in N. fowleri. Disruption of sterol biosynthesis by drug candidates was detrimental to N. fowleri. Drugs targeting three different enzymatic steps resulted in growth inhibition effect. This effect was amplified when drugs targeting different enzymes were combined. The observed synergistic effect of these drugs lowers the individual drug concentrations required for biological activity including delivering anti-PAM drugs across the blood-brain-barrier.


Schau das Video: 201706 - Meningoencefalitis amebiana primaria (August 2022).