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6.II: Aminosäuretrennung. - Biologie

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6.II: Aminosäuretrennung.

6.II: Aminosäuretrennung. - Biologie

Homogene Carboanhydrase wurde aus den Erythrozyten von weißen Leghorn-Hühnern mit einem Kamm hergestellt (Gallus Domesticus). Das Verfahren umfasste Chloroform-Ethanol-Fällung des Hämoglobins, Gelfiltration des resultierenden Extrakts auf einer Sephadex G-75-Säule und Ionenaustauschchromatographie der vereinigten aktiven Fraktionen von der Sephadex-Säule durch Salzgradientenelution auf Carboxymethylcellulose. Die Anwesenheit von Reduktionsmitteln, Dithiothreitol oder 2-Mercaptoethanol, war während der gesamten Herstellung unerlässlich, um die Stabilität der Carboanhydrase aufrechtzuerhalten.

In Hühnererythrozyten wurde nur eine Form der Carboanhydrase gefunden. Das gereinigte Enzym verhält sich bei der Sedimentation und Diffusion und bei der Polyacrylamid-Gelelektrophorese wie eine einzelne molekulare Einheit. Es ist als Esterase aktiv, mit P-Nitrophenylacetat als Substrat seine Aminosäurezusammensetzung und seine katalytischen Eigenschaften lassen darauf schließen, dass es zur Klasse der „hochaktiven“ Carboanhydrasen gehört. Seine allgemeinen Eigenschaften ähneln denen anderer Vertebraten-Carboanhydrase: S20, w 0 ist 2,9 S, das Reibungsverhältnis beträgt etwa 1,2, das Molekulargewicht beträgt 28.000 ± 1.200 aus Sedimentationsgleichgewichtsstudien, und es gibt 1 Atom fest gebundenes Zink pro Molekül. Versuche, das Zink reversibel zu entfernen, waren bisher nicht erfolgreich.

Acetazolamid hemmt stark sowohl die CO2 Hydratation und die Esterase-Aktivitäten (Kich 10 -7 m). Die Esteraseaktivität steigt mit steigendem pH-Wert zwischen 6,5 und 9,5.

Messungen der UV-Absorption, der optischen Rotationsdispersion und des Circulardichroismus zeigen enge Ähnlichkeiten mit anderen Carboanhydrasen von Vertebraten, einschließlich des Vorhandenseins von Cotton-Effekten im Bereich zwischen 285 und 295 nm.

Hühner-Carboanhydrase unterscheidet sich am auffälligsten von den entsprechenden Säugetierenzymen durch ihren hohen Halb-Cystin-Gehalt: 7 Mol Halb-Cystin pro Mol Enzym. Das Vogelenzym wird reversibel gehemmt durch P-Chlormercuribenzoat und erfordert die Anwesenheit eines Reduktionsmittels in vitro für maximale enzymatische Aktivität und strukturelle Integrität.


Entwicklung von Alpha-Lactalbuminen. Die vollständige Aminosäuresequenz des Alpha-Lactalbumins eines Beuteltiers (Macropus rufogriseus) und Korrekturen an Sequenzregionen in Rinder- und Ziegen-Alpha-Lactalbuminen.

alpha-Lactalbumin wurde aus einer Molkenproteinfraktion der Milch des Rothalswallabys (Macropus rufogriseus) gereinigt. Die vollständige Aminosäuresequenz wurde aus den Ergebnissen automatischer Sequenzieranalysen des intakten Proteins, der drei Bromcyanfragmente und von Peptiden bestimmt, die aus dem größeren COOH-terminalen CNBr-Fragment durch Verdau mit Trypsin oder Staphylokokken-Protease erzeugt wurden. Dies ist die erste Sequenz, die von einem alpha-Lactalbumin aus einem Beuteltier bestimmt wurde, und unterscheidet sich von bekannten eutherischen alpha-Lactalbuminen in Größe und Deletionspositionen in Alignments mit den homologen Typ-C-Lysozymen sowie darin, dass sie an 8 Stellen Aminosäuresubstitutionen aufweisen die in bekannten eutherischen Proteinen invariant sind. Einige Korrekturen werden auch für zwei Sequenzregionen sowohl in Rinder- als auch in Ziegen-Alpha-Lactalbuminen berichtet. Die neuen und bereits veröffentlichten Informationen zu Alpha-Lactalbumin-Sequenzen werden in Bezug auf die Evolutionsgeschichte der Alpha-Lactalbumin-Linie sowie das Verhältnis von Struktur zu Funktion in diesen Proteinen analysiert.


Designsynthese und biologische Bewertung von Novel n-Nitrosäureamid-Derivate als Leitverbindungen von Herbiziden

Eine Reihe von n-Nitrosäureamid-Derivat-Verbindungen wurden basierend auf dem aktiven Zentrum des Zielenzyms Acetohydroxysäure-Synthase (AHAS, EC: 2.2.1.6) synthetisiert. Alle Strukturen der neu hergestellten Verbindungen wurden gründlich durch zufriedenstellende IR- und 1 H-NMR-Spektren charakterisiert. Der IC50 Werte gegen AHAS-Enzym und EC50 Werte für die herbizide Wirkung gegen Amaranthus mangostanus L. und Sorghum sudanense aller synthetisierten Zielverbindungen wurden bestimmt. Die Verbindungen II-10, II-21, und II-22 mit IC50 Werte von 7,09 mg/L, 9,07 mg/L und 9,11 mg/L und die Verbindungen II-8 und II-22 mit EC50 Werte von 9,87 mg/L und 19,88 mg/L gegen Wurzel von Amaranthus mangostanus L. und Sorghum sudanense wurden jeweils abgebildet. In der Zwischenzeit wurden die möglichen Gründe für die geringere Aktivität von Verbindungen durch molekulare Docking-Vorhersagen analysiert.

1. Einleitung

Das Unkrautmanagement ist für Landwirte eine ständige Herausforderung, und kontinuierliche Innovation ist unerlässlich, um die Wirksamkeit der Managementtechnologien aufrechtzuerhalten [1]. Mit der steigenden Zahl herbizidresistenter Unkräuter [2, 3] besteht ein dringender Bedarf an neuen, selektiveren und noch potenteren Herbiziden zur Bekämpfung des unerwünschten Gemüses.

n-Nitro-substituierte Aniline zeigen unterschiedliche biologische Aktivitäten, einschließlich herbizide Eigenschaften [4], antimykotische Wirkungen [5] und pflanzenwachstumsregulierende Wirkungen [6]. Unser Labor war im Laufe der Jahre damit beschäftigt, zu erforschen n-Nitroharnstoff-Verbindungen, und einige dieser Verbindungen haben Patente erworben [7, 8]. Basierend auf der Ähnlichkeit der Struktur zwischen Sulfonylharnstoffen und n-Nitroharnstoff-Verbindungen, wir nahmen an, dass sie das gleiche zielgerichtete Enzym haben. Unsere Hypothese wurde in unserer vorherigen Studie durch die Kombination von molekularem Docking und biologischem Aktivitätsassay bestätigt [9]. Die Harnstofffunktionalität ist eine attraktive Struktureinheit, die ein breites Spektrum biologischer Aktivitäten gezeigt hat, und sie wurde in herbizide [10], antimykotische [11-17], antibakterielle [18], Pflanzenwachstumsregulatoren [19] usw. involviert .

Um eine Reihe neuer struktureller potenzieller Verbindungen als ausgezeichnete Herbizide weiter zu erforschen, eine Idee, die die verschiedenen trisubstituierten n-Nitroanilin und Benzamide, Zimtamide zusammen wurden in dieser Studie durchgeführt. Vierundzwanzig n-Nitrosäureamid-Derivat-Verbindungen wurden synthetisiert, und alle Zielverbindungen wurden biologischen Aktivitätstests gegen das AHAS-Enzym und herbiziden Aktivitätstests gegen . unterzogen Amaranthus mangostanus L. und Sorghum sudanense. In der Zwischenzeit wurden die möglichen Gründe für die geringere Aktivität von Zielverbindungen durch molekulare Docking-Vorhersage analysiert.

2. Materialien und Methoden

2.1. Instrumentierung und Chemikalien

Alle chemischen Reagenzien wurden von Shenshi Chemical Instrumentation Network Ltd. (Wuhan, China) in AR-Qualität bezogen. 1 H-NMR-Spektren wurden auf einem AM-600 MHz-Spektrometer (Bruker, Bremen, Deutschland) mit Tetramethylsilan als innerer Referenz und CDCl . aufgenommen3 als Lösungsmittel. Infrarot (IR)-Spektren wurden auf einem AVATAR330 Infrarot-Spektrometer (Nicolet, Waltham, MA, USA) mit dem KBr-Kompressionsverfahren aufgenommen. Schmelzpunkte (Schmelzpunkt) wurden auf einem X-4-Digitaldisplay-Mikroskop-Schmelzpunktgerät (Tech Instrument Co. Ltd., Peking, China) bestimmt. Das Fortschreiten der Reaktionen wurde durch Dünnschichtchromatographie (DC) an Kieselgelplatten verfolgt, die mit UV-Licht sichtbar gemacht wurden.

2.2. Allgemeines Verfahren für Mittelstufe 1

Die AC2O (30 mmol) wurde in einen 50-ml-Rundkolben gegeben und die Temperatur wurde auf 10 °C kontrolliert und HNO3 (30 mmol) wurde langsam über einen Zeitraum von 0,5 h zugegeben, und dann wurde die Reaktion etwa 0,5 h gerührt. Anschließend wurde die Mischung über einen Zeitraum von 0,5 h in weitere 100 ml Rundboden, die 2,4,6-trisubstituiertes Anilin (20 mmol) und Essigsäure (25 ml) als Lösungsmittel enthielten, gegeben und die Temperatur auf 15 °C kontrolliert C. Die Reaktionen wurden gehalten und etwa 1 h bei kontrollierter Temperatur gerührt, während ihr Fortschritt durch DC überwacht wurde.

Dann wurden die Mischungen in Eiswasser (200 ml) gegossen, und eine große Menge orangefarbenen Niederschlags erschien. Der orangefarbene Niederschlag wurde unter vermindertem Druck abfiltriert und in NaHCO . gelöst3 (5%, 30 ml) Lösung, und dann wurde HCl (2 mol/l) zugegeben, bis der pH-Wert der Lösung 5–6 erreichte, wobei eine große Menge weißen Niederschlags erneut auftrat. Schließlich wurde das Rohprodukt aus Ethanol umkristallisiert, um das Zwischenprodukt 1 zu erhalten. Die Spektrendaten des Zwischenprodukts sind in den Hintergrundinformationen enthalten (siehe ergänzendes Material online verfügbar unter http://dx.doi.org/10.1155/2016/8583765).

2.3. Allgemeines Verfahren für die Synthesezielverbindungen I1-2 und II1–22

Unterschiedlich substituierte Carbonsäure (5 mmol) und SOCl2 (7,5 mmol) wurden in CH . gelöst2Cl2 (10 ml) Lösungsmittel, zwei Tropfen n, n-Dimethylformamid (DMF) als Katalysator und Triethylamin (TEA) (5 mMol) als Säurebindemittel wurden in die obige Lösung gegeben. Die Reaktion wurde 12 h bei Raumtemperatur unter kontinuierlichem Rühren durchgeführt, was durch DC nachgewiesen wurde. Dann ist das redundante CH2Cl2 Lösungsmittel wurde durch Destillation bei reduziertem Druck bei 40°C entfernt. Schließlich wurde das Rohprodukt verschiedener substituierter Acryloylchloride erhalten.

Das Zwischenprodukt 1 (3,5 mmol) wurde in 10 ml Ethylacetat als Lösungsmittel in dem 100 ml Rundkolben gelöst und die Lösung wurde in einem Eiswasserbad aufbewahrt. Dann wurden die im vorherigen Schritt erhaltenen unterschiedlichen substituierten Acryloylchloride über einen Zeitraum von 0,5 h in die Mischungslösung getropft. Am Ende der Reaktion wurden die Zielverbindungen von einer Kieselgelsäule mit einem Elutionsmittel, das aus Petrolether bzw. Ethylacetat bestand, erhalten. Der Syntheseweg für Zielverbindungen I1-2 und II1–22 ist in Schema 1 skizziert. Die physikalisch-chemischen Eigenschaften der Zielverbindungen sind in Tabelle 1 zusammengefasst, und die Spektrendaten, die 1 H-NMR- und IR-Spektren der Zielverbindungen (wie in Abbildung S1–Abbildung S48 gezeigt) sind in den Information.


ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG

[0005] Gemäß der vorliegenden Erfindung werden Impfstoffe und Impfstoffzusammensetzungen bereitgestellt, die aus S. pneumoniae erhaltene Polypeptide und/oder Varianten dieser Polypeptide und/oder aktive Fragmente solcher Polypeptide umfassen.

[0006] Die aktiven Fragmente, wie im Folgenden definiert, umfassen einen oder mehrere Histidin-Triadenreste und/oder Coiled-Coil-Regionen solcher Polypeptide.

[0007] Der Begriff „prozentuale Identität“ oder „prozentual identisch“ bedeutet, wenn er sich auf eine Sequenz bezieht, dass eine Sequenz mit einer beanspruchten oder beschriebenen Sequenz aus einem Alignment der zu vergleichenden Sequenz (der „verglichenen Sequenz“) mit verglichen wird die beschriebene oder beanspruchte Sequenz (die „Referenzsequenz“). Die prozentuale Identität wird wie folgt bestimmt:

[0008] wobei C die Anzahl der Unterschiede zwischen der Referenzsequenz und der verglichenen Sequenz über die Länge des Alignments zwischen der verglichenen Sequenz und der Referenzsequenz ist, wobei (i) jede Base oder Aminosäure in der Referenzsequenz, die kein hat, ausgerichtete Base oder Aminosäure in der verglichenen Sequenz und (ii) jede Lücke in der Referenzsequenz und (iii) jede ausgerichtete Base oder Aminosäure in der Referenzsequenz, die sich von einer ausgerichteten Base oder Aminosäure in der verglichenen Sequenz unterscheidet, wobei jeweils eine Differenz und R die Anzahl der Basen oder Aminosäuren in der Referenzsequenz über die Länge des Alignments mit der Vergleichssequenz ist, wobei jede in der Referenzsequenz erzeugte Lücke ebenfalls als Base oder Aminosäure gezählt wird.

[0009] Wenn eine Ausrichtung zwischen der verglichenen Sequenz und der Referenzsequenz besteht, bei der die oben berechnete prozentuale Identität ungefähr gleich oder größer als eine spezifizierte minimale prozentuale Identität ist, dann hat die verglichene Sequenz die spezifizierte minimale prozentuale Identität zu der Referenzsequenz sogar obwohl Ausrichtungen existieren können, bei denen die oben berechnete prozentuale Identität kleiner als die angegebene prozentuale Identität ist.

[0010] "Isoliert" im Kontext der vorliegenden Erfindung in Bezug auf Polypeptide und/oder Polynukleotide bedeutet, dass das Material aus seiner ursprünglichen Umgebung (z. B. der natürlichen Umgebung, wenn es natürlicherweise vorkommt) entfernt wird. Beispielsweise wird ein natürlich vorkommendes Polynukleotid oder Polypeptid, das in einem lebenden Organismus vorhanden ist, nicht isoliert, sondern dasselbe Polynukleotid oder Polypeptid, getrennt von einigen oder allen der koexistierenden Materialien im natürlichen System, wird isoliert. Solche Polynukleotide könnten Teil eines Vektors sein und/oder solche Polynukleotide oder Polypeptide könnten Teil einer Zusammensetzung sein und dennoch isoliert werden, da ein solcher Vektor oder eine solche Zusammensetzung nicht Teil ihrer natürlichen Umgebung ist. Die Polypeptide und Polynukleotide der vorliegenden Erfindung werden vorzugsweise in isolierter Form bereitgestellt und vorzugsweise bis zur Homogenität gereinigt.


Kapitel 3 Aminosäuren, Peptide, Proteine

1 Kapitel 3 Aminosäuren, Peptide, Proteine ​​Beginnen Sie auch, sich AA zu merken: Namen, Strukturen, Abkürzungen, 1-Buchstaben-Codes, .

Beschreibung

Kapitel 3 Aminosäuren, Peptide, Proteine ​​Beginnen Sie auch, sich AA zu merken: Namen, Strukturen, Abkürzungen, 1-Buchstaben-Codes, pKas der Seitenketten

3.1 Aminosäuren Aminosäure ist Monomer kondensiert zu Peptid (klein) Protein (groß) Beide können durch Hydrolyse wieder zu AAs abgebaut werden (Bei neutralem pH ist die Hydrolyse langsam, aber schneller in Säure oder Base Große Menge an Proteinen wird in 20 verschiedene Aminosäuren zerlegt A. Aminosäuren haben gemeinsame Strukturmerkmale: i. C-Atomzentrum, Aminogruppe auf der einen Seite Carbonsäure auf der anderen und eine R-Gruppe, die H oder komplizierter sein kann, werden in einer Minute erforscht andere AAs, die von diesen AAs normalerweise durch posttranslationale Modifikation abgeleitet wurden (dh AA wurde verändert, nachdem es in ein Protein umgewandelt wurde) iii) Alle 20 AAs haben Trivialnamen Alle haben einen 3-Buchstaben-Code Alle haben einen 1-Buchstaben-Code Schlüsselkonvention Absatz im Text kann Ihnen helfen, sich an den 1-Buchstaben-Code zu erinnern Ich erwarte, dass Sie Codes und Strukturen für alle AAs kennen Benennen von Substituenten auf AAs ist kein Standard organische Chemie Base C wird Alpha genannt C dann von dort aus Beta, Gamma, Delta, Epsilon iv AAs erwarten Glycine a re chiral Alle AAs erwarten, dass Glycin 4 verschiedene Bestandteile um Cá herum enthält. Warum ist das wichtig? Nicht überlagerbare Spiegelbilder des chiralen Zentrums (Abbildung 3-3) optisch aktive Enantiomere (rotiert eben polarisiertes Licht und zeigt unterschiedliche Absorption von zirkular polarisiertem Licht an) Macht sich keine Sorgen um die Bezeichnung einzelner C (á,â. ) oder Ring-Cs Was tat lernst du in organisch über die Nomenklatur in diesem System?

2a. L-D (älteste) stammt aus dem Jahr 1851 Emil Fisher bezieht die Struktur auf L- oder D-Glyceraldehyd Abbildung 3-4 Unter dieser Nomenklatur sind AAs L. Alle von Lebewesen hergestellten sind L. Nimm D auf und verhungere. B. basierend darauf, wie sich ebenes polarisiertes Licht + oder AAs drehen kann entweder c. R- oder S-AAs können entweder sein. Wenn Sie gut darin sind, versuchen Sie es mit ein paar Versuchen, wird in Biochemie nicht viel verwendet, daher gehe ich nicht über B. Klassifikation nach R-Gruppen Abbildung 3-5 Haben Sie sich den gemeinsamen Teil angesehen, schauen wir uns jetzt einen anderen Teil an, die R-Gruppe Was ist nützlich chemische Eigenschaften Ladung +/Säure oder Base (gebunden an die obere Base normalerweise +. Säure normalerweise -) Polarität Tabelle 3-1 In der Lage sein, eine Aminosäure (oder Ihre gespeicherte Struktur in Abbildung 3-5) zu betrachten und in eine von 5 Gruppen einzuteilen unpolar aliphatisch G, A, P, V, L, I, M unpolar aromatisch F, Y, W Polar ungeladen S, T, C, N, Q + geladen (Base) R, K, H - geladen ( Säure) D, E Hinweis: Einige dieser Klassifikationen sind nicht eindeutig. Tyrosin ist etwas polar Beachten Sie auch: sollte sich grob an den pKa-Wert der Seitenketten erinnern Backbone COOH beträgt normalerweise etwa 2 und NH beträgt etwa 9,6

Besondere Hinweise zu Sondergruppen i. Aromaten liefern Proteinabsorption im 280-nm-Bereich (Abbildung 3-6) ii. Cystein kann als freies SH vorkommen oder reduziert werden zu

3 Cystin (Abbildung 3-7) iii. His mit einem pKa-Wert von etwa 7 wird häufig als Katalysator verwendet, da er bei neutralem pH-Wert entweder als Protonendonor oder -akzeptor wirken kann. Gelegentliche Aminosäuren haben auch wichtige Funktionen Andere in der Natur beobachtete AAs Abbildung 3-8 i. 4-Hydroyprolin (gefunden in Pflanzenzellwänden und Kollagen) ii. 5 Hydrolysin (in Kollagen enthalten) iii. 6-N-Methyllysin Gefunden in Myosin, einem Muskelprotein iv. ã Carboxyglutamat (in Blutgerinnungsproteinen enthalten) Alle oben genannten werden hergestellt, indem die Base AA in das Protein eingebaut und dann nach der Proteinherstellung modifiziert wird (posttranslationale Modifikation). (sieht aus wie Cystein mit Selen statt Schwefel) Aus Serin synthetisiert Eingebaut in sehr wenige Proteine ​​in bestimmten Organismen Ein seltener Vogel D. Aminosäuren wirken als Säuren und Basen Da die gemeinsame Form von NH und COOH sowohl Säuren als auch Basen haben Funktionen, die als Zwitterionen bezeichnet werden, wenn sie sowohl + als auch negative Form haben, auch als amphoter bezeichnet Betrachten Sie die Titrationskurve einer AA ohne geladene R-Gruppen Abbildung 3-10 COOH pKa ? (2) NH3 (9.6) Ist dies normal für ein organisches COOH und NH3? Abbildung 3-11 NO COOH ist niedriger als erwartet Normalerweise eher 4 (Essigsäure ist 4,8) NH3 ist auch niedriger als erwartet Methylamin 10.6 Können Sie das erklären? Ein niedrigerer pKa bedeutet mehr oder weniger sauer? Mehr a cidic Säurehaltigeres Mittel wird H leichter los Warum kann man H leichter loswerden? Denken wir an die vollständig protonierte Form H2A+

4 Hat Ladung auf NH3+, will H+ aus COOH loswerden um negativ zu werden (COO-) und dann keine Nettoladung auf dem Molekül. Eine andere Möglichkeit zu denken ist, dass die Wechselwirkung zwischen Ladung und Ladung das Zwitterion stabilisiert, so dass es leichter auftritt Verwenden Sie eine andere Logik für NH2. Basis ist in der Nähe von COO-. Diese elektronegativen Atome (Os von COO-) ziehen Elektronen zu sich hin. NH3+ wird leichter deprotoniert (sauerer), weil diese elektronegativen Atome dazu beitragen, das Elektron zu delokalisieren, das bei der Deprotonierung auf dem NH2 verbleibt, die NH3+-Gruppe ist saurer. E. Titrationskurven Anmerkungen folgen nicht dem Text Konstruieren Sie eine Kurve wie in Abbildung 3-10 bei welchem ​​pH-Wert hat eine negative Ladung? Bei welchem ​​pH-Wert hat sie eine positive Ladung? Bei welchem ​​pH-Wert sind neutrale pI-Formeln von Analytical isoelektrischer Punkt genannt? (pK1 + pK2)/2 Wie wäre es nun mit einer komplizierteren AA, sagen wir Glutamat oder His Abbildung 3-12

Aminosäuren mit >2 ionisierbaren Gruppen Was waren basische AAs (Lys, Arg, His) Was waren saure AAs (Asp, Glu) Wie sehen die Titrationskurven dieser AAs aus Beispiele: Glu und His Abbildung 3-12 Glu pKas 2.19, 4.25 , 9,67 Seine pKas 1,82, 6,00, 9,17 Was sind Strukturen bei diesen 2,5,7,9,10 usw. Wo ist pI? Was ist Ladung bei neutralem pH-Wert? Hinweis - Dies ist etwas Besonderes, da nur AA im Bündel mit pKa nahe neutral ist, sodass es je nach Situation entweder ionisiert oder gewerkschaftlich sein kann

5 Bevor wir gehen, schauen wir uns entweder Tyr (2.2, 9.11, 10.07) oder Cys (1.96, 10.28, 8.18) an. Beide haben 3 ionisierbare Gruppen - warum nicht Säure oder Base? Beide Säuren sind aber extrem schwach, also bei neutralem pH-Wert ungeladen, also meist nicht viel zu sehen. Wenn Sie jedoch in der Nähe einer anderen Gruppe platzieren, erhalten Sie sehr interessante Ergebnisse

3.2 Peptide & Proteine ​​Beginnen Sie nun damit, Monomer in Polymer A einzubauen. Peptide sind Ketten von Aminosäuren Kondensieren Sie 2 AAs über eine Peptidbindung, die Wasser ausstößt (wie Abbildung 3-13 an Bord) Die resultierende Peptidbindung hat spezielle Eigenschaften, die im nächsten Kapitel verwendet werden. Mal sehen einen Hinweis Ist Säure oder Base? (Amidbindung - weder) Polar oder unpolar? (Polar und leicht resonant, also noch polarer) Können Wasserstoffbrückenbindungen eingehen? (Ja für beide Seiten) Beachten Sie, dass das Gleichgewicht auf AAs ausgerichtet ist, nicht Peptide / Proteine, die abbauen müssen E eingeben, um eine Bindung zu bilden Wird sehen, wird nächstes Semester biologisch durchgeführt, Chemikalien später in diesem Kapitel Tatsächlich kinetisch langsamer Prozess, bei pH 7 t1/2 etwa 7 Jahre Säure und Base katalysiert also bei hohem oder niedrigem pH-Wert viel schneller Peptide eine Art Oberbegriff für mehrere aneinander verkettete AA's Oligopeptide 'wenige' AA's (=100) In biologischen Systemen ist das immer linear. Nicht verzweigt. Hinweis: Reihenfolge ist wichtig. Wer ist an welchem ​​Ende AA mit freier á Aminogruppe in der Hauptkette heißt Amino-terminal oder N-terminal AA mit freier Carbonsäure in der Hauptkette heißt Carboxyl-Ende oder C-terminal

6 B. Kann Peptide anhand des Ionisierungsverhaltens unterscheiden Peptide haben ionisierbare Gruppen am N- und C-Terminus sowie alle ionisierbaren Gruppen von Seitenketten. Somit kann für Peptide getan werden, was für Aminosäuren der Fall war, die Ladung bei jedem pH-Wert vorhersagen und den pI vorhersagen. Kann dies verwenden, um Methoden zur Trennung verschiedener Peptide zu finden. Entspricht nicht genau dem in 5-1 angegebenen pKa, da die Umgebung den pKa-Wert ändert. Werden Terminal COOH und NH3 zum Beispiel immer noch pKas von 2 und 9 haben? Nein - nicht mehr in der Nähe geladener Gruppen, also kein induktiver Effekt, und wird mit 4 und 10 "normaler" sein

C. Biologisch aktive Peptide gibt es in vielen Größen und Zusammensetzungen von 2 bis 1000 Resten Nutrasweet (Asp-Phe-Methylester wirken oft schon bei sehr geringen Konzentrationen viele Hormone sind Peptide Thyrotropin-Releasing-Faktor (3) Oxytocin (9 AA) Bradykinin (9 AA) Glucagon(29) Cortiotropin(39) Insulin (51 AA 30+21) Proteine ​​Cytochrom C ca. 100 Reste Titin (aus Muskel) 27.000 AA - MW 3.000.000 Durchschnittliches MW eines Restes etwa 110 Proteine ​​können auch aus mehreren Untereinheiten bestehen, also können haben mehrere miteinander verbunden! Peptidzusammensetzung Jedes Protein hat eine andere Anzahl von AAs, unterschiedliche prozentuale Zusammensetzung von AAs, unterschiedliche Sequenzen von AAs Alle haben unterschiedliche physikalische Eigenschaften Einige AAs können vorhanden sein, andere können 2 Proteine ​​nicht vergleichen Tabelle 3-3 D. Viele Proteine ​​haben neben Aminosäuren auch andere Dinge, die kovalent gebunden oder nicht kovalent assoziiert sein können, hinzugefügte Gruppen, die als prosthetische Gruppen bezeichnet werden Proteine ​​mit Gruppen, die als konjugierte Proteine ​​bezeichnet werden Lipoproteine ​​-Lipide Glykoproteine ​​-Kohlenhydrate

7 Phophoproteine ​​-Phosphorus-Hämoprotein -Häm-Metalloporteine ​​-Metalle Apoprotein - Protein ohne prothetische Gruppe 3.3 Arbeiten mit Proteinen Woher wissen wir, was wir über Proteine ​​wissen? Isolieren und charakterisieren im Labor etwas anders als in der normalen Chemie, anstatt eine neue Verbindung zu synthetisieren und aus einigen wenigen Reaktanten oder Produkten zu isolieren, versuchen Sie, ein einzelnes Protein aus einem Organismus zu isolieren, der Tausende von Proteinen enthält Wie macht man das? A. Trennung und Aufreinigung Schritt 1 Gewebe isolieren Aufbrechen der Zelle auf irgendeine Weise Zelllysieren-Zellmahlen- Beschallen- usw. resultierende Lösung, die als Rohextrakt bezeichnet wird Wenn möglich, eine bestimmte Zellorganelle isolieren, die POI (Protein von Interesse) enthält Siehe Diskussion zurück in Kapitel 1 wie das geht Dann fangen Sie an verschiedene Proteine ​​voneinander zu trennen i. Und die älteste Methode - selektive Fällung, die normalerweise Salze wie (NH4)2SO4 hinzufügt Zuerst versuchen, andere Proteine ​​​​zu ppt zu bringen Filtern und andere Proteine ​​loswerden Jetzt erhalten Sie Ihre zu ppt Speichern Sie das Filtrat und lösen Sie es in Wasser auf und zurück ins Geschäft Diese Methode ist normalerweise sehr grob , aber kann Protein aus 100 'L der Zellen pptd bis auf ein paar ml Proteinpaste erhalten, ist also nützlich Was nun? in Wasser wieder auflösen. Jetzt haben Sie Protein in Wasser gelöst, aber was ist los? Habe auch noch Salz im Wasser. Wie wird man Salz los? Dialyse Platz in Membran mit Poren lässt Salze raus hält Proteine ​​drin.

8 Kann Dialyse oft in Reinigungsverfahren verwenden, wenn kleine Ionen loswerden möchten ii. Jetzt brauchen Sie Chromatographie Was ist Chromatographie? Verfahren, bei dem eine Mischung auf ein Medium aufgetragen wird und während sich die Mischung durch das Medium bewegt, verschiedene Komponenten in der Mischung unterschiedlich verzögert werden, so dass die Materialien beginnen, sich voneinander zu trennen. Irgendwelche Beispiele für Chromatographie aus dem Unterricht?? (Eine Demo mitbringen??) Viele chromatographische Methoden, die Biochemie verwendet 3 Hauptmethoden (Abbildung 3-17) Ionenaustausch Medium ist ein festes Polymer Polymer enthält geladene Spezies Ionen mit entgegengesetzter Ladung im Medium werden vom Feststoff angezogen und haften mit unterschiedlicher Affinität Am wenigsten angezogen kommen direkt durch, am meisten angezogen kann eine dauerhafte Bindung sein Ihre kommt dazwischen? Wenn sich nicht löste Ionenstärke ändern pH-Wert ändern Größenausschlusschromatographie Polymer hat Poren unterschiedlicher Größe Kleine Kerle dringen in Löcher ein, brauchen länger, um hindurchzukommen Große Kerle sagen draußen und kommen schneller durch Nifty-Technik. Plot log MW vs Elution kann MW erhalten! Affinität Binden Sie etwas kovalent an Polymere, die das Protein gerne greift Alle anderen Proteine ​​waren durch Ihr Protein steckt fest Fügen Sie überschüssigen Liganden hinzu Spült Ihr Protein ab und ist jetzt rein Jede Methode reinigt nicht vollständig, daher werden normalerweise mindestens zwei oder mehr verwendet der oben genannten Methoden

9 Einmal rein, dann mach weiter und charakterisiere das Protein

10 B. Trennung und Charakterisierung durch Elektrophorese Eine Technik, die in der Biochemie häufig verwendet wird, ist die Elektrophorese Elektrophorese bezieht sich auf die Bewegung geladener Spezies in einem elektrischen Feld – das Schöne an dieser Technik kann sowohl zur Charakterisierung als auch zur Trennung gleichzeitig verwendet werden Sie benötigen keine reine Probe vor der Verwendung zur Charakterisierung - das Schlimme ist, dass dies keine großartige Technik für die Massentrennung ist, zu schwer zu erreichende Grammmengen. Wie funktioniert es Material in ein elektrisches Feld legen Wenn NET + bewegt sich zu Wenn NET - bewegt sich zu + Wenn keine Nettoladung? Will nicht umziehen Wie bekomme ich so keine Nettogebühr? Halte diesen Gedanken fest Was wird dich schneller bewegen? Größeres Potential (erhöht V) Mehr Ladung auf Molekül Was wird die Bewegung verlangsamen Großes Floppy-Molekül mehr Widerstand Etwas in den Weg stellen, Gelmatrix Wer hat in Zellbiologie oder Genetik verwendet, was wurde gemacht, wie hat es funktioniert Jetzt können wir Proteine ​​​​probieren Wenn pH PI, Ladung ist -, gehe zu + So können Sie sehen, ob Proteine ​​getrennt werden, je nachdem, wie nahe oder weit pH von pI ist Was sonst? Größe/Struktur So ziemlich komplex für ein Charakterisierungswerkzeug Siehe Abbildung 3-18b zur Elektrophorese von fraktionierten Proteinen Kann mit einigen speziellen Untertechniken vereinfacht werden SDS-Gelelektrophorese Detergens hinzufügen Natriumdodecylsulfat CH3(CH2)11SO4-Na+ Hydrophob bindet an Protein Etwa 1 Molekül SDS/2 AA

11 Protein wird denaturiert, sodass jede Struktur weggeblasen wird Erhält eine gleichmäßige Beschichtung mit negativer Ladung, wandert also auf einfache Weise. Tatsächliche Migration relativ zum logarithmischen MW Abbildung 3-19 für SDS-Gel So erhalten Sie ein Maß für MW und Reinheit in einem einfachen Schuss! Isoelektrische Fokussierung Erinnern Sie sich an den vorherigen Gedanken Wenn pH pI PH = pI sich nicht bewegt Gel mit pH-Gradienten unter Verwendung einer Mischung aus organischen Säuren und Basen herstellen Abbildung 3-20 Auf ein Ende des Gels auftragen und bis zum Anschlag bewegen lassen. Jetzt bei pH den pH-Wert des Gels messen und pI haben. Jetzt wissen Sie, warum wir die pI-Werte früher berechnet haben, es kann ein Wert experimentell ermittelt werden Kann beides in einem kombinieren Abbildung 3-21 Dies ist eine hochmoderne Technik auf dem neuen Gebiet der 'Proteomik' Die Untersuchung von Veränderungen, die in Proteinen auftreten, kann einen Wirt von Proteinen miteinander vergleichen Person zur nächsten Person, um zu sehen, wie sich die Unterschiede unterscheiden und auf die klinische Situation anwenden C. Quantifizierung von Protein Wenn Sie ein Protein reinigen, müssen Sie in der Lage sein, das Protein in Gegenwart der anderen Proteine ​​​​nachzuweisen und zu quantifizieren Wenn dies das erste Mal ist, dass das Protein gereinigt wurden, haben Sie keine Ahnung von seinen physikalischen oder chemischen Eigenschaften, sodass Sie diese nicht als mögliche Marker verwenden können Für Proteine, die Enzyme sind, müssen Sie einen Assay erstellen Um einen Assay zu erstellen, müssen Sie Folgendes wissen: Die chemische Reaktion, die das Enzym katalysiert A Möglichkeit, die Kinetik des Auftretens des Produkts oder des Verschwindens des Substrats zu verfolgen Wenn das Enzym Cofaktoren benötigt Abhängigkeit der Aktivität von der Substratkonzentration Optimaler pH-Wert T, bei dem es stabil und am aktivsten ist

12 Gemäß internationaler Vereinbarung 1 Aktivitätseinheit -Menge an Enzym, die benötigt wird, um 1,0 ìMol Substrat / Minute bei 25 °C zu transformieren Aktivität - Gesamte Enzymeinheiten in einer Lösung Spezifische Aktivität - Anzahl der Enzymeinheiten pro mg Protein Die spezifische Aktivität ist ein Maß der Enzymreinheit Sollte sich während des Aufreinigungsverfahrens erhöhen Sollte maximiert sein ant ist konstant, wenn das Enzym rein ist Der Einmal-Assay kann jetzt den POI betrachten, während die Aufreinigung stattfindet Tabelle 3-5 Beachten Sie den Unterschied zwischen Aktivität und spezifischer Aktivität Spezifische Aktivität ist Aktivität/Gewicht des Proteins. Sollte am Ende maximal sein Woher wissen Sie, wann die Reinigung abgeschlossen ist? Nur 1 Protein im SDS-Gel Spezifische Aktivität ist max. Proteine, die keine Enzyme sind, sind etwas problematisch! 3.4 Kovalente Struktur von Proteinen Wie wir im nächsten Kapitel sehen werden, gibt es vier Strukturhierarchien in Proteinen 1o Struktur - Die Verbindung zwischen Aminosäuren - Kovalente Struktur Sequenz und Disulfide o 2 Struktur - Lokale Struktur von Aminosäuren und nächsten Nachbarn 3o Struktur - Gesamt 3D-Faltung 4o-Struktur – wie Peptide zu einer größeren Polypeptidstruktur assoziieren Dieser Abschnitt befasst sich mit 1, wird im nächsten Kapitel mehr über 2, 3 und 4 sprechen (1o-Struktur) A. Die Funktion eines Proteins hängt von seiner Sequenz ab Jede Art von ein Protein hat eine einzigartige Sequenz die einzigartige Sequenz lässt es sich zu einer einzigartigen 3D-Struktur falten Die 3D-Struktur verleiht dem Protein seine einzigartige Funktion Ändern der Sequenz Ändern der Funktion Führt zu genetischen Krankheiten Proteine ​​mit ähnlichen Funktionen in verschiedenen Spezies können ähnliche Sequenzen haben

13 Nicht ganz 'eiserne' 20-30% oder Proteine ​​beim Menschen sind polymorph Das heißt - haben kleine Variationen in der Sequenz Sogar innerhalb von Proteinen Einige Regionen haben mehr Variabilität als andere B. Aminosäuresequenzen wurden für Millionen von Proteinen bestimmt 1953 Brief lesen Jahr für Biochem Watson und Crick abgeleitete DNA-Doppelhelix Sanger erarbeitete Sequenz von Insulin Dr. Z. geboren Erhalt der Insulinsequenz wichtig, weil das erste Protein überhaupt sequenziert wurde Die meisten Proteinsequenzierungen werden jetzt durch DNA-Sequenzierung durchgeführt, weil sie schnell und einfach ist Es gibt auch bessere aktuelle instrumentelle Methoden (Abschnitt E Massenspektroskopie) Aber ich werde in diesem Kapitel etwas Zeit damit verbringen, die älteren klassischen Methoden zu skizzieren. C. Klassische Proteinsequenzierung Da ich diese klassischen Techniken gelernt habe, werde ich der Vollständigkeit halber einige zusätzliche ältere Techniken in Green aufnehmen. Ich weiß nicht, ob ich das in die Vorlesung einbauen werde oder nicht. Sobald wir ein Protein isoliert haben und bevor wir mit der Analyse der Sequenz beginnen, gibt es einige Dinge, die das Buch überspringt. I. Bestimmung des Molekulargewichts Eines der ersten Dinge, die wir jetzt wollen, ist das Molekulargewicht. Denn das wird uns ungefähr sagen, wie viele AAs wir haben. Wie bekommt man MW? Habe gesehen, dass SDS-Gel- und Gelpermeationschromatographie ein MW von +/- 5 % ergeben, also nicht besonders genau Kann weiter entfernt sein, wenn funky Protein Der neue Technologieweg führt über die Massenspektroskopie Wie funktioniert die Massenspektroskopie? Ladung auf Material (verschiedene Arten - machen wir uns keine Sorgen) Kann jetzt Ladung verwenden, um Material im elektrischen Feld zu beschleunigen Sobald Bewegung kann Masse durch Beobachten von Material erkennen Wie lange dauert die Reise?

14 - Wie schnell dreht es sich in einem Magnetfeld Aus diesen Messungen kann man Masse/Ladungs-Verhältnis und daraus Masse gewinnen Methoden für organische Moleküle seit 20 Jahren etabliert In den letzten 10 Jahren wurde auf große Moleküle wie Proteine ​​II ausgeweitet. Aminosäurezusammensetzung Der nächste Schritt besteht normalerweise darin, die allgemeine AA-Zusammensetzung zu erhalten. Wird verwendet, um Proteine ​​​​miteinander zu vergleichen, und können wir als Überprüfung verwenden, wenn Sie die endgültige Sequenz haben, um sicherzustellen, dass sie mit bekannten Daten übereinstimmt. ich. Protein entweder in starker Säure oder Base hydrolysieren (Kochen in 6 M HCL, 12, 24, 48 Stunden Dies schlägt Proteine ​​in AA Getrennte AAs durch Chromatographie und Quantifizierung Alles wurde auf Maschinen mechanisiert, die Aminosäureanalysatoren genannt werden Benötigen Sie ein paar mg Protein Einige Säuren zerstört in base, others in acids, so usually need both acid and base hydrolysis can double check results against MW to be sure you have everything Note - this only tells you overall % composition, NOT sequence. For that you need to dig harder C. Sequence Determination i. (a start) Figure 3-25 Take protein and modify with FDNB 2,4-dinitrofluorobenzene also called Sanger reagent after inventor of process show structure on board. This chemical spontaneously reacts with all free amines on proteins. Where would you find free amines? N terminus and lys. Do AA analysis again. Will find modified lysines because they will run a bit differently, but not-aproblem, will find 1 AA in the whole bunch that runs differently because now has 2,4-DNB group attached, and that is your N-terminus so have identified AA 1 ii. (continued) Figure 3-27 Let’s try to get more than one residue the chemical phenylisothiocyanate is another reagent that reacts with free amines This is called an Edman Degradation after Pehr Edman, inventor With this reagent, if you hit the protein with 6M HCL for just a minute (not the boiling for 24 hrs required for hydrolysis)- the reagent forms a phenylthiohydantoin derivative that pulls of the first AA and leaves the rest

15 of the protein unchanged run extract on HPLC, identify AA hit protein a another time to get next AA Again has been automated into a machine called a protein sequenator Use a few mg of protein and read off sequence Not quite that simple Reaction not 100% Say only 97% Lets say sequence is gly-pro-lys Reaction 1 get 97% of gly off end Reaction 2 get 3% of gly that missed first time, and .97(.97) or .94% fo pro off Reaction 3 get 6% of pro and now only .94x.97 or 91% of lys Can see getting less and less of correct AA and more and more of other AA’s Usually can get to between 20 and 50 before gets so bad that can’t follow any further. So can’t do entire protein this way Note machine works ‘fast’, get this in about 24 hours

Getting the complete sequence So need to cut protein into smaller pieces i. Remember that protein MAY contain a few disulfide Need to take care of these first Not removed by other procedure and may interfere Can remove disulfides by 2 methods (figure 3-28) Oxidation with performic acid Reduction with dithiothreitol Will air oxidize back together so need Additional acetylation step to prevent re-oxidation ii. Now can cut into peptides Use with chemical methods (CNBr) Or enzymes to cut into smaller pieces See table 3-6 for specificity Get peptides Sequence peptide iii. Note: Which one goes first, second, third?? Need second cleavage method (or more) So get overlaps and put overlaps together Have linear sequence

16 Still have to go back to disulfides Cleave it again Isolate peptides If get peptides tied together and have 2 N terminals then are tied by disulfides. Put with other information to get complete sequence Summarized Figure 3-25 E. Current Methods - Mass Spec I have outlined classical approach done biochemistry from 1950's thru 1980's Mass spectrometry has largely changed this Classical mass spec Get an ion in a vacuum moving in a magnetic field Magnetic field make ion move in a curved path From analysis of path can determine m/z (mass to charge) ratio If know change can then determine mass very accurately. Big problem for proteins can you see it? How do you get a protein with 100's to 1000's of amino acids into the gas phase? 2 ways MALDI - Matrix Assisted laser desorption Ionization ESI - Electrospray Ionization MALDI not well described in text Put protein solution on a light absorbing matrix Put in vacuum Hit with a laser that is at the same wavelength as matrix Pulse of laser light destroys matrix and protein is released into the vacuum. Matrix also ionizes protein Time how long it takes the protein ion to travel down a tube Analogy - how do you make an elephant fly? By blowing the ground out from underneath him! ESI Figure 3-30 Solution with protein is pumped through a tiny needle The needle is charged with high + voltage Outside of needle is a vacuum Sprays out fine mist of charged micro droplets Micro droplets are also + charged with protons

17 Solvent in droplets evaporates in vacuum Charge gets condensed onto protein And protein is in vacuum, so it is a gas phase ion usually with multiple charges and can do mass spec Get family of peaks each +1 in mass and charge (due to added proton) So can figure out the base peak Takes very little protein - as little as in a peak of a 2D gel We have such a machine at BHSU in Dr. D’s Lab Sequencing with Mass spec Figure 3-31 Can sequence short peptides with tandem mass spec (also designated MS/MS) Cleave peptide into fragments as did with older techniques Shoot the fragments onto an HPLC As an individual fragment comes off the HPLC put it on an ESI mass spec As fragment peak comes of the mass spec, bombard it with a ‘collision gas’ (usually Ar or Ne) This makes peptide break- usually at a peptide bond Now run it through a second mass spec and read off the size of all the fragments. From the size of the fragments and the known masses of the amino acids can figure out the sequence Note Val and and ILE have same mass so not perfect Comparison Standard chemical methods, slow, require comparatively large amounts Mass spec methods - fast - use trace amounts Ambiguity between Val and Ile Some peptide fragments don’t work so can be gaps DNA methods Also fast, require no protein But DNA and then RNA may be processed so DNA sequence is not the same as the protein sequence! So may need all three to properly characterize a protein!!

F. Small Peptides and Proteins can be Chemically Synthesized As chemist ultimate test is synthesize have done analysis, think you know 1o sequence. Best proof you are right is to synthesize from scratch. If what you make has identical properties to

18 what is found in nature, then you had it right. How do you synthesize a protein with a MW in the 1000's? Do standard chemical synthesis as in chem lab, get about 4 residues. Need something new and different Bruce Merrifield invented way to link AA to insoluble resin and cycle reactions to make efficient, simple and mechanized. Got Nobel prize. What I will show you is not his original chemistry, but a modern evolution using his principles Figure 3-32 Works well. Synthesizers cost 10-50K One problem, reaction not 100% So slowly errors accumulate See table 3-7 Practical limit about 100 AA if everything is optimal, but usually lower Need to do solution chemistry to link peptides together if you want a large protein Compare with biology On synthesizer can prepare 100AA protein in a few days and it is about 80% pure E coli, does in 5 seconds, 100% correct G. Amino Acid Sequences Provide Important Biochemical Information Now have protein 1o structure. What good is it? Can provide insight into 3-D structure/function Cellular location Evolution Structures of 1000's of proteins available on web sequences many more sequence available Search sequence for similarities and relationships BIOINFORMATICS Structure/function Have been trying to predict structure from sequence for many years- still can’t do it But if part of a family, (usually 25% sequence homology) Can look at family’s structure and function

19 And make a good guess Sometime not entire protein, but a ‘domain’ will work Also certain sequences Signals for location of protein in cell Tell where to attach prosthetic groups H. Protein sequences can elucidate History Bioinformatics - extracting information from sequence related proteins should have similar sequence Should be able to trace changes in sequence to evolution But not linear Some AA and protein critical so can change or change slowly Others are less critical so can change quickly So get different evolutionary rates Also complicated by gene transfer Where genes from one organism are are transferred to another rather than evolving This is how bacteria gain antibiotic resistance So usually focus on family of closely relate proteins Usually essential for metabolism of cell So little chance of transfer! For example EF-1á in eukariots or EF-Tu in bacteria a protein needed for protein synthesis (chapter 27) Homologous proteins or homologs Homologous proteins from different species called orthologs “ Same Paralogs Figure 3-33 So use computer programs to search data bank to see if your sequence lines up with another sequence or family of sequences Tricky programing - gaps, changes, etc Is change conservative (same amino acid properties- say ASP for GLu) or radical (Say Gly for Phe) Layer on top of this statistics for random or non-random alignment Integrate together to come up with evolutionary tree Figure 3-35 or 3-36


Objective. polymers, liquid crystals, instrumental methods

1. Polymer formed by the polymerization of hexamethylene diamine and adipic acid is i) Teflon ii) Nylon 6,10 iii) Nylon 6,6 iv) Bakelite 2. Polymer obtained by the polymerization of only one type of monomer molecule is i) Homopolymer ii) Copolymer iii) Heteropolymer iv) Addition polymer 3. Polymer obtained by the polymerization of two or more different types of monomer molecules is i) Homopolymer ii) Copolymer iii) Heteropolymer iv) Addition polymer 4. Stereoregular polymers are i) Isotactic, syndiotactic, atactic ii) Natural and synthetic iii) Addition and condensation iv) Elastomers, plastics and fibres 5. Compounding converts i) Plastics in to resins ii) Resins in to plastics iii) Vulcanized rubber iv) All the above 6. Polymerisation of tetra fluoro ethylene yields i) PTFE ii) PMMA iii) Butyl rubber iv) Bakelite 7. Plexi glass (PMMA) is obtained by the polymerization of i) Methyl meth acrylate ii) Isobutylene iii) Isocyanate iv) Urethane 8. Teflon is made soft by adding i) Di -iso n butyl phthalate ii) Quartz iii) Silicate iv) Camphor 1

9. Disproportionation of polymer chain growth yields i) Polymer with longer chain length ii) Two polymers with shorter chain lengths iii) Three Polymers iv) Any of the above is possible 10. Degree of crystallinity i) Decreases Tg value ii) Stabilises Tg value iii) Increases Tg value iv) Does not affect Tg value 11. Mol wt of a polymer usually i) Decreases Tg value ii) Stabilises Tg value iii) Increases Tg value iv) Does not affect Tg value 12. Branching in the polymer chain i) Decreases Tg value ii) Stabilises Tg value iii) Increases Tg value iv) Does not affect Tg value 13. Which of the following polymer is a very good insulator i) Nylon 6,6 ii) Teflon iii) Polyethylene iv) Neoprene 14. Repeating unit present in natural rubber is i) Isoprene ii) Chloroprene iii) Butane iv) Propene 15. Repeating unit present in neoprene rubber is i) Isoprene ii) Chloroprene iii) Butane iv) Propene 16. Polyureathane is formed by the polymerization of i) Isobutylene and isoprene ii) Phenol and formaldehyde iii) Di isocyanate and diol iv) Urethane 17. Bakelite is a polymer of i) Phenol and formaldehyde ii) Urea and formaldehyde iii) 2-methyl, 1,3-butadiene iv) Di isocyanate and diol

18. Polymer used as cement to hold electric bulb to hold their metal holders is i) Bakelite ii) Novolac iii) Butyl rubber iv) Polyurethane 19. Polymer used in army weapons is i) Bakelite ii) Teflon iii) Urea-formaldehyde resin iv) None of the above 20. IUPAC name of chloroprene is i) 2-chloro-1,3-butadiene ii) 2-methyl-1,3-butadiene iii) Isobutene iv) Isobutene and isoprene 21. IUPAC name of isoprene is i) 2-chloro-1,3-butadiene ii) 2-methyl-1,3-butadiene iii) Isobutene iv) Isobutene and isoprene 22. Conducting polymers can be obtained from the following reaction i) Doping ii) Chlorination iii) Polymerisation iv) Bromination 23. The most suitable oxidizing agent for oxidative doping of polyacetylene is i) Acidified potassium dichromate ii) Iodine vapours iii) Iodine in carbon tetrachloride iv) Sodium naphthalide in THF 24. The most suitable reducing agent for reductive doping of polyacetylene is i) Acidified potassium dichromate ii) Iodine vapours iii) Iodine in carbon tetrachloride iv) Sodium naphthalide in THF 25. Oxidative doping of polymers is i) p-doping ii) n-doping iii) Both i) and ii) iv) None of tha above 26. Following polymer is an organic metal i) Conducting polyacetylene ii) Conducting polyaniline iii) Conducting polythiophene iv) All the conducting polymers 3

27. Which of the following polymers is used in smart windows i) Conducting polyacetylene ii) Conducting polyaniline iii) Conducting polythiophene iv) All the conducting polymers 28. Commercial name of epoxy resin is i) Epon & Araldite ii) Teflon iii) Plexi glass iv) Novolac 29. Epoxy resin is prepared by the polymerization of i) Bisphenol A ii) Epichlorohydrin iii) Bisphenol A and epichlorohydrin iv) Phenol and formaldehyde 30. Which of the following polymers has higher Tg value i) Teflon ii) Polyethylene iii) PVC iv) Nylon66 31. The polymers used in telecommunication system, air crafts wiring, solar cells is i) Conducting polymers ii) Synthetic rubbers iii) Epoxy resins iv) All the polymers 32. Polymers containing polar groups dissolve in or readily attacked by i) Non polar solvents ii) Polar solvents iii) All the organic solvents iv) Water 33. Polymers containing non polar groups dissolve in/readily attacked by i) Non polar solvents ii) Polar solvents iii) All the organic solvents iv) Water 34. Starch is a polymer of i) -glucose ii) -glucose iii) Fructose iv) Galactose 35. Cellulose is a polymer of i) -glucose ii) -glucose iii) Fructose v) Galactose 4

36. The process of adding plasticizers is called i) Plasticization ii) Polymerisation iii) Condensation iv) None of these 37. Proteins are natural polymers containing i) - amino acids ii) -amino acids iii) Both i) and ii) iv) None of the above 38. Bakelite is a thermosetting polymer because i) It consists of 2 different monomer molecules ii) Long linear chain iii) The different chains of Bakelite are held together through strong covalent (Sigma) bonds iv) Reason is not clear 39. Polymer used in the preparation of automobile tyres and tubes is i) Buna-s ii) Polysytrene iii) Neoprene rubber iv) Butyl rubber 40. Excellent substitute for glass is i) PMMA (plxiglass/Lucite) ii) Buna-s iii) Teflon iv) Polyurethane 41. Polymer used in artificial eye parts, airplane cockpit, signal light lens and Television screens is i) PMMA ii) Buna-S iii) Polycarbonate iv) Polyurethane 42. Bullet proof polymer is i) Polycarbonate ii) P-F resin iii) Polyurethane iv) Conducting polymers 43. The polymer which is used for making non stick utensils is i) Polyurethane ii) Bakelite iii) Teflon iv) All the above 44. The function of sulphur in the vulcanization of rubber is i) It decreases the elasticity 5

More ductile Less plastic and non stick All the above

45. Addition polymerization reactions i) Need initiators ii) Acid catalysed reactions iii) Base catalysed reactions iv) Will initiate without initiators 46. Bisphenol A is manufactured by the reaction of i) Phenol and acetone ii) Phenol and aromatic aldehyde iii) Phenol and formaldehyde iv) Phenol and aniline 47. Collodion is i) Cellulose nitrate ii) Cellulose acetate iii) Ethyl and methyl cellulose iv) Cellulose 48. Celluloids are i) Cellulose nitrate ii) Cellulose acetate iii) Ethyl and methyl cellulose iv) Cellulose 49. When P/F is less than 1, the product formed is i) Novolac ii) Bakelite iii) Mixture of Novolac and Bakelite iv) None of the above 50. When P/F is greater than 1, the product formed is i) Novolac ii) Bakelite iii) Mixture of Novolac and Bakelite iv) None of the above 51. Arrange the following polymers in increasing order of their intermolecular forces: Nylon-66, Buna-S, Plythene i) Polythene < Buna-S < Nylon-66 ii) Polythene < Nylon-66 < Buna-S iii) Nylon-66 < Buna-S < Poythene iv) Buna-S < Polythene


Рекомендованный список диссертаций по специальности «Органическая химия», 02.00.03 шифр ВАК

«Получение и структурное исследование биологически активных соединений на основе имидазолиевых ионных жидкостей» 2015 год, кандидат наук Сейткалиева Марина Максутовна

«Новые каталитические системы в реакциях карбонилирования олефинов, спиртов и органических галогенидов» 2015 год, доктор наук Елисеев Олег Леонидович

Имидазолиевые ионные жидкости в качестве экстрагентов, модификаторов кварцевого капилляра и хиральных селекторов в капиллярном электрофорезе 2017 год, кандидат наук Колобова, Екатерина Алексеевна

Исследование особенностей структурирования ионных жидкостей методом ЭПР 2020 год, кандидат наук Иванов Михаил Юрьевич

Создание аппаратурно-технологического оформления каталитических превращений аренов, протекающих с участием ионных жидкостей 2020 год, кандидат наук Клименко Антон Сергеевич


Analyse structurale et fonctionnelle de gènes voisins du locus de l'a .

Analyse structurale et fonctionnelle de gènes voisins du locus de l'a .

UNIVERSITE DE LIMOGES FACULTE <strong>de</strong>s Sciences <strong>de</strong> LIMOGES ECOLE DOCTORALE Science – Technologie – Santé Laboratoire <strong>de</strong> Génétique biochimique <strong>et</strong> <strong>de</strong> Cytogénétique Thèse N°1916 Thèse pour obtenir le gra<strong>de</strong> <strong>de</strong> Docteur <strong>de</strong> l’Université <strong>de</strong> Limoges Discipline / Spécialité : Biologie, Sciences, Santé présentée <strong>et</strong> soutenue publiquement par Xavier MATA le 03 Novembre 2003 <strong>Analyse</strong> <strong>structurale</strong> <strong>et</strong> <strong>fonctionnelle</strong> <strong>de</strong> <strong>gènes</strong> <strong>voisins</strong> <strong>du</strong> <strong>locus</strong> JURY : <strong>de</strong> l'α-lactalbumine caprine : application à la recherche d'éléments cis-régulateurs à eff<strong>et</strong> dominant. Thèse co-dirigée par Hubert LEVEZIEL (Université/INRA) <strong>et</strong> Jean-Luc VILOTTE (INRA) Bourse co-financée par l’INRA <strong>et</strong> la région Limousine Dr Bruce A. WHITELAW, Roslin Institute, Rapporteur. Dr Eve DEVINOY, INRA, Rapporteur. Prof Raymond JULIEN, Université/INRA, Examinateur. Dr Edmond P. CRIBIU, INRA, Examinateur. Dr Hubert LEVEZIEL, Université/INRA, Examinateur. Dr Jean-Luc VILOTTE, INRA, Examinateur.