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8.4: Schneiden und Einfügen von DNA – Restriktionsverdaus und DNA-Ligation – Biologie

8.4: Schneiden und Einfügen von DNA – Restriktionsverdaus und DNA-Ligation – Biologie


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Restriktionsenzyme

Viele Bakterien besitzen Enzyme, die spezifische DNA-Sequenzen erkennen (normalerweise 4 oder 6 Nukleotide) und dann die doppelsträngige DNA-Helix an dieser Sequenz schneiden (Abbildung (PageIndex{7})). Diese Enzyme werden als ortsspezifisch bezeichnet Restriktionsendonukleasen, oder einfacher “Restriktionsenzyme“, und sie fungieren auf natürliche Weise als Teil der bakteriellen Abwehr gegen Viren und andere Quellen fremder DNA. Um DNA an bekannten Stellen zu schneiden, verwenden die Forscher Restriktionsenzyme, die aus verschiedenen Bakterienarten gereinigt wurden und von verschiedenen kommerziellen Quellen bezogen werden können. Diese Enzyme werden normalerweise nach dem Bakterium benannt, aus dem sie zuerst isoliert wurden. Zum Beispiel, EcoRI und EcoRV sind beide Enzyme aus E coli. EcoRI schneidet doppelsträngige DNA an der Sequenz GAATTC, aber beachten Sie, dass dieses Enzym wie viele andere nicht genau in der Mitte der Restriktionssequenz schneidet (Abbildung (PageIndex{8})). Die Enden eines Moleküls geschnitten von EcoRI haben eine überhängende Region einzelsträngiger DNA und werden daher manchmal als bezeichnet Klebrige Enden. Auf der anderen Seite, EcoRV ist ein Beispiel für ein Enzym, das beide Stränge genau in der Mitte seiner Erkennungssequenz schneidet und so genannte stumpfe Enden, denen Überhänge fehlen.

DNA-Ligation

Der Prozess von DNA Liga tritt auf, wenn DNA-Stränge durch die Wirkung eines Enzyms namens . kovalent miteinander verbunden sind DNA Ligase. Moleküle mit klebrigen Enden mit komplementären überhängenden Sequenzen sollen kompatible Enden, die ihre Verbindung zu rekombinanter DNA erleichtern. In ähnlicher Weise werden zwei Sequenzen mit stumpfen Enden ebenfalls als kompatibel betrachtet, um sich miteinander zu verbinden, obwohl sie nicht so effizient miteinander ligieren wie klebrige Enden. Hinweis: Moleküle mit klebrigen Enden mit nicht komplementären Sequenzen ligieren nicht mit DNA-Ligase. Die Ligation ist daher von zentraler Bedeutung für die Produktion rekombinanter DNA, einschließlich der Insertion eines doppelsträngigen DNA-Fragments in einen Plasmidvektor.


Schau das Video: Restriktionsenzyme u0026 DNA-Ligasen einfach erklärt - Werkzeuge, Methode, Grundlagen der Gentechnik 1 (Kann 2022).


Bemerkungen:

  1. Hippolytus

    Bravo, was für Worte ... toller Gedanke

  2. Fenuku

    Wo kann ich es finden?

  3. Benicio

    Ich bemerkte eine Tendenz, dass viele unzureichende Kommentare in Blogs erschienen. Ich kann nicht verstehen, ob jemand es so spammen? Und warum, zu jemandem, der einen Bastard macht))) imho dumm ...



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