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DNTP-Konzentration für die reverse Transkription von RNA zu cDNA

DNTP-Konzentration für die reverse Transkription von RNA zu cDNA


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Beeinflusst es die Ergebnisse, wenn ich die Hälfte der dNTP-Menge in einer Reaktion verwende, die in meinem Protokoll angegeben ist? Normalerweise verwende ich 4 Mikroliter pro Reaktion und dieses Mal habe ich einen Fehler gemacht und ich habe 2 verwendet.

Die endgültige cDNA wird für die relative qPCR-Kuantifizierung verwendet, daher bin ich mir nicht sicher, ob dies meine Ergebnisse beeinflusst.


Es wird dir wahrscheinlich gut gehen. Niedrigere dNTP-Spiegel können die Produktmenge reduzieren, die Sie erhalten, da es normalerweise die Primer oder die dNTPs sind, die gegen Ende der Reaktion auslaufen. Der einzige andere Effekt, der mir bekannt ist, ist, dass die Reaktion möglicherweise etwas weniger spezifisch ist, da dNTPs Magnesium sequestrieren, was ein großer Faktor bei der Bestimmung der Stringenz der Reaktion ist.

Sie sagen, wie viele Mikroliter Sie verwendet haben, aber es wäre sinnvoller, wenn Sie die Konzentrationen der dNTPs und die gewünschte Endkonzentration angeben würden.


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